有机分析试剂与蛋白质的显色反应及其应用研究

论文摘要

在查阅大量关于染料与蛋白质作用的文献基础上,提出了用对-二甲胺基亚苄罗丹宁（p-DBR）、对-氯酚偶氮罗丹宁（CPARH）、4-（2-噻唑偶氮）-1,3-二羟基萘（TADNm）、2-2’-苯并噻唑偶氮-1,8-二羟基-3,6-萘二磺酸（BTAC）等测定蛋白质的方法。 1.研究了蛋白质与p-DBR的结合反应,HSA浓度在3.6x10-8mol·L-1～1.0x10-7mol·L-1范围内,该反应符合Pesavento模式。反应的最佳条件为pH8.0,7.0x10-5mol·L-1p-DBR,1.25×10-4mol·L-1CTMAB,室温显色15min。在该条件下,HSA与p-DBR生成橙黄色复合物,最大吸收波长在480nm,表观摩尔吸光系数为3.4x106L·mol-1·cm-1。该方法可用来测定生物样品中的蛋白质,线性范围为1.2mg·L-1～11.0mg·L-1,最低检测限为0.42mg·L-1,回收率为95%～102%。 2.研究了蛋白质与CPARH的结合反应。反应的最适条件为:pH4.0,2.0×10-4mol·L-1CPARH,5.0x10-5mol·L-1CTMAB,室温显色15min。在此条件下,HSA与CPARH生成橙黄色复合物,最大吸收波长为460nm,表观摩尔吸光系数为4.7x105L·mol-1·cm-1。利用该体系可测定蛋白质,线性范围为12.0mg·L-1～96.0mg·L-1。 3.研究了蛋白质与TADNm的结合反应。该反应在HSA浓度为3.6x10-7mol·L-1～8.1×10-7mol·L-1范围,符合Pesavento模式,最大结合数为212。显色反应的最适条件为pH5.0,1.5×10-4mol·L-1TADNm,0.0050%Triton X-100,室温显色10min。HSA与TADNm生成橙红色复合物,最大吸收波长在500nm,表观摩尔吸光系数为5.1×105L·mol-1·cm-1。用HSA-TADNm复合物测定血清等生物样品中蛋白质时,线性范围为12.0mg·L-1～48.0mg·L-1,最低检测限为2.1mg·L-1。 4.研究了蛋白质与BTAC的结合反应。该反应的最适条件为pH4.0,1.25×10-4mol·L-1BTAC,室温显色15min。HSA-BTAC复合物为紫红色,最大吸收波长为580nm,表观摩尔吸光系数为2.7×105L·mol-1·cm-1。该方法可用来测定生物样品中的蛋白质,线性范围为48.0mg·L-1～120.0mg·L-1,最低检测限为8.0mg·L-1。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 文献综述
• 1.1.1 蛋白质结构与功能
• 1.1.2 蛋白质的检测方法
• 1.2 本学位论文的设想
• 第2章 对-二甲氨基亚苄罗丹宁测定HSA
• 2.1 实验
• 2.1.1 仪器与试剂
• 2.1.2 实验步骤
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 重复文献[109]实验
• 2.2.2 HSA-p-DBR复合物的吸收曲线
• 2.2.3 条件优化
• 2.2.4 共存物质的影响
• 2.2.5 样品分析
• 2.3 反应机理研究
• 2.3.1 HSA与p-DBR的结合反应
• 2.3.2 结合模式
• 2.3.3 离子强度对HSA与p-DBR结合反应的影响
• 2.4 小结
• 第3章 对-氯苯酚偶氮罗丹宁测定HSA
• 3.1 仪器与试剂
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 HSA-CPARH复合物的吸收曲线
• 3.2.2 条件优化
• 3.2.3 共存物质的影响
• 3.2.4 样品分析
• 3.3 小结
• 第4章 4-（2-噻唑偶氮）-1，3-二羟基萘测定HSA
• 4.1 仪器与试剂
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 HSA-TADNm复合物的吸收曲线
• 4.2.2 条件优化
• 4.2.3 共存物质的影响
• 4.2.4 样品分析
• 4.3 反应机理研究
• 4.3.1 最大结合数
• 4.3.2 结合模式
• 4.3.3 离子强度对反应体系的影响
• 4.4 小结
• 第5章 2-[2'-苯并噻唑偶氮]-1，8-二羟基-3，6-萘二磺酸测定HSA
• 5.1 仪器与试剂
• 5.2 结果与讨论
• 5.2.1 HSA-BTAC复合物的吸收曲线
• 5.2.2 条件优化
• 5.2.3 共存物质的影响
• 5.2.4 样品分析
• 5.3 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢