鸡蛋清蛋白酶解产物的抗氧化性研究

论文摘要

鸡蛋富含营养物质,对人类健康非常重要。许多学者关于蛋清蛋白酶解产物抗肿瘤、抗高血压、免疫调节等研究已取得显著成果,而对蛋清酶解产物抗氧化性的研究相对较少,更缺乏系统性。本研究以蛋清粉为原料,研究鸡蛋清酶解产物的抗氧化性,采用超滤、离子交换和凝胶过滤等分离手段分离制备高活性抗氧化肽,并对其抗氧化活性进行综合评价。为提高蛋清蛋白附加值、鸡蛋深加工及应用开辟新途径。从六种蛋白酶中选产高抗氧化活性蛋清酶解物的蛋白酶,以超氧阴离子清除率为指标,确定了碱性蛋白酶在pH8.0、50℃、加酶量10000U/g蛋白时,5h酶解物的超氧阴离子清除率最高,比未酶解时高出4.65%。通过超滤、离子交换和凝胶过滤层析等方法从碱性蛋白酶酶解液（HEW）中提取蛋清抗氧化肽。HEW经超滤除去杂蛋白,又经DEAE-52离子层析得到HEW-2-2, SephadexG-25凝胶层析得到蛋清抗氧化肽HEW-2-2-3,IC50由最初33.41 mg/mL降到5.63mg/mL,抗氧化肽纯化了近6倍,蛋白回收率为13.42%,经薄层层析检测为单点,凝胶层析估测相对分子量约为273Da。蛋清抗氧化肽HEW-2-2-3清除自由基能力不及维生素C,对OH,O2-·、DPPH的IC50分别为0.871mg/mL、5.630mg/mL、0.636mg/mL,清除·OH、DPPH能力较强,清除O2-·能力最弱,还原能力很弱,对脂质氧化的抑制作用很强,与维生素E相当。蛋清抗氧化肽HEW-2-2-3具有较好的抗氧化活性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 鸡蛋清及其生物活性肽
• 1.1.1 鸡蛋的组成
• 1.1.2 鸡蛋清的组成及性质
• 1.1.3 鸡蛋清生物活性肽
• 1.2 自由基及其氧化损伤
• 1.2.1 自由基的形成
• 1.2.2 自由基的氧化损伤
• 1.2.3 抗氧化剂与自由基的关系
• 1.2.4 抗氧化活性体外检测方法
• 1.3 抗氧化肽及其研究进展
• 1.3.1 抗氧化肽的种类及制备方法
• 1.3.2 抗氧化肽的构效关系
• 1.3.3 抗氧化肽的研究进展
• 1.4 研究目的和意义
• 1.5 研究内容
• 第二章 蛋白酶酶解鸡蛋清产物的抗氧化性研究
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验试剂
• 2.1.3 实验仪器
• 2.1.4 溶液配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 蛋白酶活力测定：Folin-酚法
• 2.2.2 蛋清酶解液制备
• 2.2.3 蛋白含量测定：Folin-酚法
• 2.2.4 水解度测定：三氯乙酸法
• 2.2.5 超氧阴离子清除率测定：邻苯三酚自氧化法
• 2.2.6 数据统计与分析
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 蛋白酶
• 2.3.1.1 蛋白酶的种类
• 2.3.1.2 蛋白酶的酶活力
• 2.3.2 蛋白酶对鸡蛋清的酶解能力
• 2.3.3 蛋清酶解产物抗氧化性研究
• 2.3.3.1 产高抗氧化活性酶解产物时间的确定
• 2.3.3.2 产高抗氧化活性酶解产物蛋白酶的确定
• 2.4 小结
• 第三章 鸡蛋清抗氧化肽分离纯化及分子量测定
• 3.1 材料
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 实验试剂
• 3.1.3 实验仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 蛋清酶解液HEW制备
• 3.2.2 超滤分离
• 3.2.3 DEAE-52离子交换层析分离
• 3.2.3.1 离子柱制备
• 3.2.3.2 离子柱上样
• 3.2.3.3 离子柱分离
• 3.2.4 Sephadex G-25凝胶过滤层析分离
• 3.2.4.1 凝胶柱制备
• 3.2.4.2 凝胶柱上样
• 3.2.4.3 凝胶柱分离
• 3.2.5 纯度鉴定：薄层层析法
• 3.2.6 相对分子量测定
• 3.2.7 数据统计与分析
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 超滤分离
• 3.3.2 DEAE-52离子交换层析分离
• 3.3.3 Sephadex G-25凝胶过滤层析分离
• 3.3.4 抗氧化肽HEW-2-2-3的纯度鉴定
• 3.3.5 抗氧化肽HEW-2-2-3相对分子量测定
• 3.4 小结
• 第四章 鸡蛋清体外抗氧化肽活性研究
• 4.1 材料
• 4.1.1 实验材料
• 4.1.2 实验试剂
• 4.1.3 实验仪器
• 4.1.4 溶液配制
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 羟自由基（·OH）清除能力测定
• 2^-·）清除能力测定'>4.2.2 超氧阴离子自由基（O₂^-·）清除能力测定
• 4.2.3 DPPH·自由基清除能力测定
• 4.2.4 还原能力测定
• 4.2.5 抑制脂质过氧化能力
• 4.2.6 数据统计与分析
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 抗氧化肽对·OH清除能力
• 2^-·清除能力'>4.3.2 抗氧化肽对O₂^-·清除能力
• 4.3.3 抗氧化肽对DPPH·清除能力
• 4.3.4 抗氧化肽还原能力
• 4.3.5 抗氧化肽抑制脂质过氧化能力
• 4.4 小结
• 第五章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 参考文献
• 致谢