论文摘要
目的:采用RT-RCR、Western杂交等分子生物学技术,检测在Ca2+拮抗剂A23187诱导下,人肺鳞癌细胞SK-MES-1中GRP78及GRP94的表达水平,并分析其表达与肺癌细胞对VP-16耐药的相关性。方法:应用细胞培养技术,将培养的SK-MES-1细胞用含有不同浓度的诱导剂A23187（0、0.5、1、1.5、2、4、6μM）处理24小时。然后采用RT -PCR、Western杂交检测各组细胞中GRP78和GRP94在核酸及蛋白水平的表达,同时利用细胞克隆形成法测定细胞在VP-16作用下的生存率。根据GRP78和GRP94的表达水平与细胞生存率的测定结果,分析这两种蛋白与肺鳞癌细胞对VP-16耐药的关系。结果:A23187可以明显诱导人肺鳞癌细胞SK-MES-1 GRP78及GRP94的表达,且表达水平与A23187具有一定的浓度依赖性,但两者在核酸和蛋白水平的变化并非完全一致。在A23187的作用下,不同处理组细胞GRP78与GRP94的核酸表达量分别提高到对照组的1.4-3.9及1.1-2.4倍。同样,在蛋白质水平,GRP78与GRP94的表达量也分别增加到对照组的2.1-5.3及1.9-3.1倍。细胞克隆形成法测定显示:诱导组细胞（A23187浓度为1-6μM）对VP-16的IC50值明显高于对照组,而且IC50值的升高亦呈A23187浓度依赖性,最大耐药指数为4.4（A23187浓度为6μM）。根据上述各组细胞的IC50以及GRP78和GRP94表达的变化趋势,可以推断:GRP78和GRP94能够提高SK-MES-1细胞对VP-16的耐药性,并且其耐药性与GRP78及GRP94的表达程度有关。结论:本研究表明,Ca2+拮抗剂A23187能够诱导人肺鳞癌细胞SK-MES-1GRP78和GRP94的表达,且其表达水平与A23187具有一定的浓度依赖性,GRP78和GRP94高表达的细胞对VP-16的IC50值明显高于低表达的细胞,表明GRP78与GRP94的表达与肺癌细胞对VP-16的耐药性有关,有针对性地抑制基因表达或抑制其功能可能成为肺癌治疗的新思路、新方法。
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