论文摘要
第一部分THP-1细胞中MLL-AF9融合基因的融合位点序列鉴定【目的】从急性单核白血病细胞系THP-1中克隆出MLL-AF9融合基因断裂点序列,并对其进行序列测定分析。【方法】利用RT-PCR方法从急性单核白血病细胞系THP-1中扩增出MLL-AF9融合基因断裂点附近序列,并用T-A克隆方法将其克隆至T载体上,经酶切鉴定后,进行序列测定分析。【结果】从急性单核白血病细胞系THP-1克隆出了MLL-AF9断裂点附近序列,大小为528bp,测序后示MLL基因断裂点位于外显子9,与AF9基因外显子5发生融合。【结论】本实验成功克隆了THP-1细胞系MLL-AF9断裂点的cDNA序列,为针对该序列设计特异性的siRNA进行基因沉默实验做准备。第二部分抑制MLL-AF9融合基因对THP-1细胞增殖的影响【目的】研究MLL-AF9融合基因对急性单核白血病细胞系THP-1细胞增殖的影响。【方法】选择THP-1细胞特有的MLL-AF9融合基因为靶基因,设计并合成siRNA片段。以人急性单核白血病细胞系THP-1为靶细胞,应用脂质体转染方法,将siRNA导入细胞,通过流式细胞仪检测siRNA转染效率,RT-PCR法比较转染前后MLL-AF9 mRNA表达水平的变化,MTT法检测细胞增生抑制率,并通过Hoechst33258染色观察siRNA作用于THP-1后细胞凋亡形态特征,流式细胞仪检测细胞凋亡水平和细胞周期的改变。【结果】siRNA转染效率为69.1%±1.8%,转染siRNA后MLL-AF9基因表达量大幅度减少（P<0.01）,THP-1生长受到明显抑制,G0/G1期细胞增多（P<0.01）,S期细胞减少（P<0.01）,并使细胞周期阻滞于G0/G1期;凋亡小体增多,凋亡水平增加（P<0.01）,而对照组则无上述表现（P>0.05）。【结论】MLL-AF9融合基因维持和促进人急性单核白血病细胞THP-1的增殖。第三部分MLL-AF9融合基因对THP-1细胞p27表达调控的影响【目的】研究MLL-AF9融合基因对人急性单核白血病细胞系THP-1的p27表达及转录调控的影响。【方法】选择THP-1细胞特有的MLL-AF9融合基因为靶基因,设计并合成siRNA片段。应用脂质体转染方法,将siRNA导入细胞,通过流式细胞仪检测siRNA转染效率,RT-PCR法比较转染前后MLL-AF9 mRNA表达水平的变化,Western Blot检测MLL-AF9蛋白水平沉默效果,比较细胞周期抑制蛋白p27表达变化,利用染色质免疫沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation ,ChIP）研究MLL-AF9融合蛋白是否与p27启动子结合。【结果】转染siRNA后THP-1细胞MLL-AF9表达明显受抑（P<0.01）,p27表达上调（P<0.01）,应用染色质免疫沉淀技术结合PCR扩增的方法分析发现MLL-AF9融合蛋白可与THP-1细胞p27基因启动子区域的DNA片段结合。【结论】急性单核白血病细胞系THP-1中的MLL-AF9融合蛋白通过与p27启动子的结合下调p27基因的表达。
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- [1].佛波酯对人单核白血病细胞THP-1中颗粒溶素表达的激活作用[J]. 中国生物制品学杂志 2014(05)
- [2].LPS诱导下THP-1细胞基因表达内参基因的筛选[J]. 中西医结合心脑血管病杂志 2013(10)
- [3].阿奇霉素对人单核白血病细胞THP-1髓系细胞触发受体-1的调节作用[J]. 中国生物制品学杂志 2011(01)
- [4].全反式维甲酸联合低剂量阿糖胞苷诱导人急性粒-单核白血病细胞株ACC247凋亡的研究[J]. 临床血液学杂志 2015(02)
- [5].组织工程表皮与单核白血病细胞共培养的致敏性检测模型[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2011(20)
- [6].地西他滨体外对小鼠急性粒-单核白血病细胞WEHI-3的抗肿瘤作用及机制探讨[J]. 解放军医学院学报 2018(10)
- [7].金黄色葡萄球菌PV杀白细胞素S组分体外诱导单核白血病细胞株THP-1巨噬细胞的研究[J]. 医学研究生学报 2019(12)
标签：急性单核细胞白血病论文; 融合基因论文; 细胞系论文; 表达调控论文;