慢性束缚应激对昆明小鼠脾淋巴细胞免疫功能及其小鼠前胃癌（MFC）移植瘤生长和血管形成的影响

论文摘要

背景与目的:近年来心理社会因素在肿瘤发生发展中的作用越来越受到关注,但其具体作用机制尚不清楚,本研究旨在探讨慢性束缚应激对昆明小鼠脾淋巴细胞免疫功能及其小鼠前胃癌（mouse forestomach carcinoma,MFC）移植瘤生长和血管形成的影响,以期为探讨心理社会因素对恶性肿瘤发生发展的作用及其机制提供一些依据。方法:第一部分:昆明小鼠慢性束缚应激模型的建立将60只昆明小鼠按完全随机设计分为正常饲养组、单纯肿瘤组、单纯束缚组及肿瘤加束缚组,每组15只,在统计分析时将正常饲养组和单纯肿瘤组视为对照组,单纯束缚组和肿瘤加束缚组视为慢性束缚应激组。对慢性束缚应激组小鼠采用自制束缚筒进行慢性束缚应激,对照组正常饲养,共3周,观察小鼠大体行为、体重、进食量、饮水量变化并测定小鼠悬尾实验和强迫游泳实验不动时间。第二部分:慢性束缚应激对昆明小鼠脾淋巴细胞免疫功能及其小鼠前胃癌（MFC）移植瘤生长的影响单纯肿瘤组及肿瘤加束缚组小鼠于实验第4周时建立MFC皮下移植瘤模型,种瘤后10d处死全部小鼠,测量移植瘤体重量,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖及对MFC细胞的生长抑制能力,酶连免疫吸附试验（enzyme-linked immunoabsorbent assay, ELISA）检测脾淋巴细胞产生IL-2的能力。第三部分:慢性束缚应激对昆明小鼠移植瘤血管形成的影响酶连免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达水平,免疫组织化学法检测MFC移植瘤组织VEGF蛋白和微血管密度（MVD）表达水平。结果:第一部分:昆明小鼠慢性束缚应激模型的建立束缚应激3周后小鼠表现为精神萎靡、呆滞,活动减少,进食、饮水量下降,毛色无光泽,束缚应激期间小鼠体重增长缓慢,慢性束缚应激组小鼠悬尾和强迫游泳实验不动时间均较对照组延长。第二部分:慢性束缚应激对昆明小鼠脾淋巴细胞免疫功能及其小鼠前胃癌（MFC）移植瘤生长的影响单纯肿瘤组瘤重1.39±0.39g,肿瘤加束缚组瘤重2.10±0.52g,与单纯肿瘤组相比,肿瘤加束缚组的MFC移植瘤生长较快,肿瘤增长率达51.08%（Ρ<0.01）;正常饲养组、单纯肿瘤组、单纯束缚组和肿瘤加束缚组小鼠脾T淋巴细胞刺激指数分别为1.77±0.22、1.70±0.17、1.69±0.18、1.22±0.15,脾B淋巴细胞刺激指数分别为1.73±0.14、1.65±0.17、1.64±0.21、1.33±0.11,效靶比在5∶1和10∶1时小鼠脾淋巴细胞对MFC细胞的生长抑制率分别为（23.01±4.76）%、（19.47±3.70）%、（16.81±3.68）%、（7.14±5.00）%和（33.03±3.91）%、（28.34±4.58）%、（24.94±2.97）%、（13.49±7.94）%,脾淋巴细胞培养上清中IL-2含量分别为260.03±14.96 pg/ml、239.78±10.93 pg/ml、238.11±13.50 pg/ml、186.34±10.42 pg/ml,两因素方差分析揭示慢性束缚应激和MFC移植瘤均使小鼠脾淋巴细胞增殖能力、对MFC细胞的生长抑制能力及产生IL-2的能力减弱,并且两者具有交互效应,其中以慢性束缚应激的影响程度较大（Ρ<0.01）。第三部分:慢性束缚应激对昆明小鼠移植瘤血管形成的影响正常饲养组、单纯肿瘤组、单纯束缚组和肿瘤加束缚组小鼠的血清VEGF水平分别为497.424±19.427 pg/ml、519.286±17.343 pg/ml、515.676±14.153 pg/ml、559.620±11.724 pg/ml,两因素方差分析揭示慢性束缚应激和MFC移植瘤都使小鼠血清VEGF含量增加,两者存在交互效应,其中以慢性束缚应激的影响程度较大（Ρ<0.01）,单纯肿瘤组和肿瘤加束缚组MFC移植瘤组织中VEGF和MVD表达分别为0.117±0.012（OD值）、0.145±0.011（OD值）和22.87±3.68（条）、26.53±4.41（条）,两组间相比,差异有显著统计学意义（Ρ<0.01）。结论:第一部分:昆明小鼠慢性束缚应激模型的建立该模型小鼠在心理情绪方面发生了变化,表现出明显的应激抑郁状态,可进一步应用于慢性束缚应激与小鼠脾淋巴细胞免疫功能以及MFC移植瘤间关系的研究。第二部分:慢性束缚应激对昆明小鼠脾淋巴细胞免疫功能及其小鼠前胃癌（MFC）移植瘤生长的影响慢性束缚应激可使小鼠脾淋巴细胞增殖能力、对MFC细胞的生长抑制能力及产生IL-2的能力减弱,从而削弱小鼠免疫功能,促进MFC移植瘤生长。第三部分:慢性束缚应激对昆明小鼠MFC移植瘤血管形成的影响慢性束缚应激可促进小鼠血清VEGF水平升高和MFC移植瘤组织中VEGF与MVD表达,通过血管形成促进MFC移植瘤生长。

论文目录

• 符号说明
• 摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 昆明小鼠慢性束缚应激模型的建立
• 1 材料与方法
• 2 观察指标
• 3 统计学方法
• 4 结果
• 5 讨论
• 参考文献
• 第二部分：慢性束缚应激对昆明小鼠脾淋巴细胞免疫功能及其小鼠前胃癌移植瘤生长的影响
• 1 材料
• 2 方法与步骤
• 3 结果
• 4 讨论
• 参考文献
• 第三部分：慢性束缚应激对昆明小鼠移植瘤血管形成的影响
• 1 材料
• 2 方法与步骤
• 3 结果
• 4 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 附图
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士学位间发表的文章