长途运输应激猪组织损伤与hsps mRNA转录、HSPs表达相关性研究

论文摘要

应激是机体受到应激性刺激后所产生的一种非特异性反应，适当的应激对机体有利，但是过强或维持时间过长的应激可以造成组织和器官的病理性损伤，甚至导致动物猝死。运输应激每年为世界经济带来巨大损失，且目前国际上对运输应激没有统一的判定标准。应激时，组织细胞中的热休克蛋白（HSPs）的含量会发生急剧变化，维持细胞内环境平衡，帮助细胞耐过生物逆境。 本试验将在相同环境中饲养的18头出栏育肥猪随机均分为A～F等6组，每组3头。试验当日，对照组猪（A组）处于正常饲养环境，其他各试验组猪用动物运输车辆分别进行1h（B组）、2h（C组）、4h（D组）、6h（E组）和10h（F组）的运输应激，路途运输模拟国内普通等级公路的运输状况（当时室外温度为18～25℃），速度控制在50～60km·h-1，整个运输过程没有饮水和喂食。对运输应激到试验设定时间的试验组猪进行及时剖杀，采取血液，分离血清用于肌酸激酶（CK）和谷草转氨酶（AST）的检测；采取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结等组织一份，固定于10％中性福尔马林溶液中，用于病理组织学观察和Hsp27、Hsp70以及Hsp90的免疫组织化学检测；同样两份组织样品用液氮速冻后，冻存于-70℃冰箱，用于hsp70mRNA和hsp90 mRNA定位和定量检测，探讨长途运输应激猪组织损伤与hsps mRNA转录、HSPs表达之间的相关性。 利用组织学以及临床病理学等方法，研究长途运输应激对育肥出栏猪组织的应激性损伤。结果表明：长途运输应激初期（1～2h），反映组织损伤的肌酸激酶（CK）和谷草转氨酶（AST）在血液中的含量都显著升高（P＜0.05）；运输应激4h时，CK及AST活性有所下降，和对照组相比差异不显著（P＞0.05）；而当运输应激持续到6h和10h时，CK和AST活性又显著升高。组织学观察，在长途运输应激初期（1～2h），所检组织均出现毛细血管扩张充血、细胞急性肿胀等急性病理性损伤变化，损伤程度较为严重；运输应激4h时，各组织的病理损伤与应激初期相似，但血管的充血程度有所减轻；运输应激持续到6～10h时，各组织尤其心肌纤维的损伤程度进一步加剧。长途运输应激可以导致组织细胞应激性损伤，并且组织的损伤程度随着应激时间的延长有所波动。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一篇 文献综述
• 第一章 热休克蛋白（HSPs）研究进展
• 1 HSPs的分类和命名
• 2 HSPs的基因特点和转录调控
• 2.1 热休克元件（heat shock element,HSE）
• 2.2 热休克因子（heat shock factor,HSF）
• 2.3 HSPs的转录调控
• 3 HSPs mRNA与翻译
• 4 序列与功能
• 4.1 HSPs序列特点
• 4.2 蛋白质序列与功能
• 5 HSPs与细胞凋亡
• 5.1 HSPs对线粒体通路介导细胞凋亡的调控作用
• 5.2 HSPs对死亡受体通路介导细胞凋亡的调控作用
• 5.3 HSPs对细胞内抗凋亡及促凋亡信号转导通路的调控作用
• 6 HSPs的生物学功能
• 6.1 分子伴侣功能
• 6.2 HSPs与免疫
• 6.3 HSPs维持细胞或生物体的动态平衡,保护它们免遭各种应激因素的损害
• 6.4 HSPs保护细胞内重要遗传物质DNA及对生物生长、发育和分化的作用
• 6.5 HSPs参与体内许多调节过程
• 6.6 HSPs对脑的保护作用
• 6.7 HSPs作为细胞间的信号分子
• 6.8 HSPs向细胞外的分泌作用
• 6.9 细胞因子功能
• 7 HSPs与疾病
• 7.1 HSPs与肿瘤
• 7.2 HSPs的自身免疫反应和抗炎症活性
• 7.3 HSPs与心血管疾病
• 7.4 HSPs与病毒性疾病
• 8 生物标识物
• 参考文献
• 第二篇 试验研究
• 第二章 长途运输应激对猪组织的应激性损伤
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物及试验设计
• 1.2 主要试验材料
• 1.3 试验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 运输应激猪血液中相关酶含量的变化
• 2.2 受试猪组织的组织病理变化
• 3 讨论
• 第三章 HSPs在长途运输猪组织细胞中的分布
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物及试验设计
• 1.2 主要试验材料
• 1.3 免疫组织化学
• 2 结果与分析
• 2.1 HSPs在运输应激猪肺组织中的定位和分布
• 2.2 HSPs在运输应激猪心肌中的定位和分布
• 2.3 HSPs在运输应激猪肝脏中的定位和分布
• 2.4 HSPs在运输应激猪脾脏中的定位和分布
• 2.5 HSPs在运输应激猪背最长肌中的定位和分布
• 2.6 HSPs在运输应激猪淋巴结中的定位和分布
• 2.7 HSPs在运输应激猪肾脏中的定位和分布
• 3 讨论
• 第四章 原位杂交法检测HSP70 MRNA和HSP90 MRNA在运输应激猪组织细胞中的分布
• 1 材料与方法
• 1.1 仪器和材料
• 1.2 方法
• 2 试验结果
• 2.1 重组质粒的提取和线性化
• 2.2 阳性质粒的鉴定
• 2.3 斑点杂交试验结果
• 2.4 原位杂交结果
• 3 讨论
• 第五章 运输应激猪HSPS MRNA转录水平荧光定量RT-PCR方法的建立
• 1 材料与方法
• 1.1 仪器和材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 重组质粒的提取和线性化
• 2.2 阳性质粒的鉴定及体外转录RNA
• 2.3 荧光定量RT-PCR标准曲线
• 2.4 荧光定量RT-PCR方法的特异性
• 2.4 荧光定量RT-PCR方法的敏感性
• 3 讨论
• 第六章 长途运输应激对猪组织细胞中HSP MRNA转录水平的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物及试验设计
• 1.2 仪器和材料
• 1.3 试验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 运输应激对心脏和肝脏中hsp70 mRNA和hsp90 mRNA转录水平的影响
• 2.2 运输应激对肺脏和淋巴结中hsp70 mRNA和hsp90 mRNA转录水平的影响
• 2.3 运输应激对肾脏和背最长肌中hsp70 mRNA和hsp90 mRNA转录水平的影响
• 3 讨论
• 第七章 运输应激猪HSPs定量方法探讨
• 1 材料与方法
• 1.1 仪器和材料
• 1.2 组织样品的处理
• 1.3 Western blotting
• 1.4 Dot blotting
• 2 结果与分析
• 2.1 丽春红S染色结果
• 2.2 Western blotting结果
• 2.3 Dot blotting结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 热应激对SH-SY5Y细胞中PRP MRNA及HSP90 MRNA转录水平的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验设计
• 1.2 仪器和材料
• 1.3 试验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 阳性质粒和体外转录RNA的鉴定
• 2.2 FQ RT-PCR标准曲线和标准方程
• 2.3 HSP和PrP mRNA转录水平的变化
• 3 讨论
• 参考文献：
• 试剂的配制
• 1 免疫组织化学常用试剂的配制
• 2 原位杂交常用试剂的配制
• 3 蛋白质定量常用试剂的配制
• 全文总结
• 致谢
• 论文发表情况