水红花子中黄酮的分离分析及抗氧化性研究

论文摘要

本文研究了中药水红花子中黄酮类化合物的提取、纯化与测定方法,同时对水红花子中黄酮粗提物及花旗松素清除1,1-二苯基苦基苯肼（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical,简称DPPH）的能力进行了初步探讨。（1）总黄酮的提取。以总黄酮的得率为检测指标,分别采用了超声提取法和微波提取法进行提取。通过单因素实验以及正交实验,确定了两种提取方法的最佳提取工艺,微波提取法效果较好,总黄酮得率达3.41%。（2）总黄酮的纯化。比较了五种大孔树脂的吸附、解吸性能,选择S-8型大孔树脂纯化水红花子总黄酮,采用浓度为1.50mg/mL水红花子提取液以1BV/h流速上柱,60%乙醇1BV/h流速进行洗脱,所得总黄酮粗品纯度达83.26%。（3）花旗松素的分离。采用铅盐沉淀、硅胶柱层析和制备型反相高效液相色谱三种方法对水红花子中花旗松素进行分离纯化。确定了最佳分离条件,其中制备型反相高效液相色谱法效果较好,产品纯度可达96.26%。（4）总黄酮和花旗松素的测定。总黄酮的测定,利用分光光度法,以芦丁为对照品,得芦丁浓度C（μg/mL）与吸光度A的回归方程:A=3.81×104+6.66×C（r=0.99935）,芦丁浓度在8～64μg/mL的范围内线性关系良好,加标回收率97.5%～103.3%;花旗松素的测定,采用高效液相色谱法,色谱条件为:Lichrospher C18柱（150mm×4.6mm:5μm）,流动相为甲醇-0.3%的乙酸水溶液（35∶65,v/v）等度洗脱,检测波长290nm,流速0.8mL/min,柱温25℃,得花旗松素浓度C与峰面积Y的回归方程:Y=1.54×103+1.40×104×C（r=0.99995）,线性范围25～150μg/mL。（5）总黄酮提取物和花旗松素抗氧化性实验。采用不同溶剂提取的黄酮粗提物均具有一定程度清除DPPH自由基的能力,但清除能力差异较大,其强弱顺序为甲醇＞乙醇＞水＞乙酸乙酯＞氯仿;花旗松素清除DDH自由基的能力略高于芦丁对照品,证实了花旗松素具有较强的抗氧化能力。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 前言
• 1.2 水红花子的生物学性状
• 1.3 水红花子的化学成分
• 1.3.1 黄酮类
• 1.3.2 木脂素类
• 1.3.3 二苯乙烯类化合物及其他
• 1.4 水红花子的药理作用
• 1.5 天然产物中黄酮类化合物研究进展
• 1.5.1 天然产物中黄酮类化合物的提取
• 1.5.2 天然产物中黄酮类化合物的分离纯化
• 1.5.3 黄酮类化合物分析
• 1.6 黄酮类化合物生物活性与应用
• 1.6.1 黄酮类化合物的生物活性
• 1.6.2 黄酮类化合物的应用
• 1.7 本课题研究目的和意义
• 第二章 水红花子中总黄酮的提取
• 2.1 超声提取
• 2.1.1 超声提取法原理
• 2.1.2 实验部分
• 2.1.3 结果与讨论
• 2.2 微波提取
• 2.2.1 微波提取原理
• 2.2.2 实验部分
• 2.2.3 结果与讨论
• 2.3 小结
• 第三章 水红花子中黄酮的纯化
• 3.1 水红花子中黄酮的纯化
• 3.1.1 仪器与试剂
• 3.1.2 实验部分
• 3.1.3 结果与讨论
• 3.2 铅盐沉淀法分离纯化水红花子中花旗松素
• 3.2.1 仪器与试剂
• 3.2.2 实验部分
• 3.2.3 结果与讨论
• 3.3 硅胶柱层析分离纯化花旗松素
• 3.3.1 仪器与试剂
• 3.3.2 实验部分
• 3.3.3 结果与讨论
• 3.4 制备色谱分离纯化花旗松素
• 3.4.1 仪器与试剂
• 3.4.2 实验部分
• 3.4.3 结果与讨论
• 3.5 小结
• 第四章 水红花子中黄酮的测定
• 4.1 仪器与试剂
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 水红花子中总黄酮定性分析的原理与方法
• 4.2.2 水红花子总黄酮定量分析的原理与方法
• 4.2.3 水红花子中花旗松素的测定
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 水红花子总黄酮定性分析结果
• 4.3.2 水红花子总黄酮定量分析结果
• 4.3.3 水红花子中花旗松素的测定分析
• 4.4 小结
• 第五章 水红花子黄酮提取物及花旗松素抗氧化性研究
• 5.1 黄酮类化合物清除自由基测定原理
• 5.2 实验部分
• 5.2.1 仪器与试剂
• 5.2.2 样品制备
• 5.2.3 测定
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 测定波长的选择
• 5.3.2 DPPH工作曲线的绘制
• 5.3.3 花旗松素清除DPPH自由基能力
• 5.3.4 芦丁清除DPPH自由基能力
• 5.3.5 水红花子黄酮粗提液清除DPPH自由基能力
• 5.3.6 红蓼不同提取部位黄酮粗提液清除DPPH自由基能力
• 5.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果