导读:本文包含了体外分离培养论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:Cajal样间质细胞,胆固醇,凋亡,增殖
体外分离培养论文文献综述
许金煌,范莹[1]（2019）在《胆固醇对体外分离培养的豚鼠胆囊Cajal样间质细胞的影响》一文中研究指出目的研究胆固醇对体外分离培养的豚鼠胆囊Cajal样间质细胞(ICLCs)增殖、凋亡的影响。方法体外分离培养豚鼠胆囊ICLCs,用含不同质量浓度[0 mg/L(空白组)及12.5、25、50、100 mg/L(实验组)]的胆固醇培养液作用于细胞24 h后,CCK-8法检测细胞的增殖率,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blot检测细胞受体酪氨酸激酶(c-kit)蛋白的表达量,实时荧光定量PCR检测细胞c-kit mRNA的表达水平。结果用含25、50、100 mg/L质量浓度胆固醇的培养液培养ICLCs后,与空白组相比,实验组ICLCs的增殖率明显下降(P<0.05);ICLCs的凋亡率明显增加(P<0.05);c-kit蛋白表达及c-kit mRNA表达均明显下降(P<0.05)。结论高浓度的胆固醇能够抑制ICLCs的增殖并促进ICLCs的凋亡,ICLCs增殖率下降可能是SCF/c-kit信号通路受阻所致。(本文来源于《中国临床研究》期刊2019年11期）
魏钰,魏民[2]（2019）在《人骨关节炎软骨细胞的体外分离与培养》一文中研究指出背景:大量针对骨关节炎细胞水平的研究仍集中在动物模型关节软骨细胞的体外培养。动物模型引发的退变效应与人骨关节炎的发生并不完全一致。如何利用人骨关节炎软骨组织构建体外细胞模型并研究其特征性蛋白变化趋势,是模拟体内骨关节炎软骨退变过程的关键。目的:探讨人骨关节炎软骨细胞的体外分离、培养方法,观察原代至第3代人骨关节软骨细胞的形态学特性和相关蛋白表达变化。方法:取6例因重度骨关节炎行关节置换术患者的废弃软骨组织(获得中国人民解放军总医院医学伦理委员会批准,伦理批号为S2017-23-7),男2例,女4例;年龄62-72岁,平均(68.3±3.39)岁,采用一步酶消化法(Ⅱ型胶原酶)分离培养人骨关节炎软骨细胞,并进行传代培养,从而构建体外人骨关节炎软骨细胞培养体系。倒置相差显微镜观察各代细胞形态;苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫荧光染色方法进行细胞鉴定。采用Western blot法检测各代软骨细胞于70%融合率时Col2a、Aggrecan与MMP-13的表达。结果与结论:经过Ⅱ型胶原酶消化后,培养1周左右可见组织块周围爬出散在的细胞,3周左右可传代进行下一步研究;形态学、苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色与Ⅱ型胶原免疫荧光染色证明培养出的细胞为人软骨细胞。第3代软骨细胞Col2a、Aggrecan的相对表达量与原代比较有明显降低(P<0.01),且随着培养代数增加表达逐渐降低;MMP-13随着培养代数的增加表达逐渐增强(P <0.01)。结果表明,Ⅱ型胶原酶一步消化法可成功从标本中分离出骨关节炎软骨细胞并传代培养。体外培养的骨关节炎软骨细胞去分化特性随着传代次数增加而逐渐增强,功能性蛋白表达整体下降。3代以内的软骨细胞符合人骨关节炎时软骨退变的表现,可能是用于实验研究的最佳选择。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年25期）
金鑫,张曼,王云鹤,魏方,温婧怡[3]（2019）在《绵羊瘤胃上皮细胞的体外分离培养、冻存及复苏方法》一文中研究指出本研究旨在建立绵羊瘤胃上皮细胞(Ovine rumen epithelial cells,ORECs)的分离培养、冻存和复苏方法,为反刍动物瘤胃功能的研究和相关瘤胃疾病的发病机制研究提供功能性的细胞模型。以绵羊瘤胃为研究对象,采用胰蛋白酶连续消化法对瘤胃组织进行不同时间(40、30、20、10、10、8和5 min)的消化,并对每次消化后的瘤胃组织和消化液分别进行H.E染色分析和显微镜观察,以确定细胞开始收集及终止消化的时间,最后将收集的瘤胃上皮细胞进行原代培养。在传代培养时,运用差时消化法和差速贴壁法对ORECs进行纯化,并从细胞形态学、细胞生长曲线、角蛋白18(CK-18)免疫荧光染色和上皮细胞标志物E-钙黏蛋白和碱性磷酸酶基因表达等方面对ORECs进行鉴定。然后设置不同体积配方的冻存液,将传代细胞进行冻存,通过检测复苏后的细胞活力和24 h贴壁率确定最佳冻存液配方。结果表明:第4次消化后就基本消化到瘤胃组织的棘层,此时即可开始收集细胞;第7次消化完后瘤胃上皮的基底层细胞基本被消化掉,此时即可终止消化细胞。经纯化后传代的细胞呈现均一的"铺路石"形态,生长曲线明显呈"S"形,且经CK-18免疫荧光染色后鉴定为阳性,同时PCR检测到上皮细胞特异性标志蛋白E-钙黏蛋白和碱性磷酸酶均有表达。此外,ORECs经不同体积配方冻存液冻存复苏后发现,冻存液配方为V_(FBS)∶V_(DMEM)∶V_(DMSO)=9∶0∶1时ORECs的细胞活力及贴壁率最高,且传代后的细胞生长状况良好。因此本试验成功建立了ORECs的体外分离培养、冻存和复苏方法。(本文来源于《中国农业大学学报》期刊2019年05期）
黎欢,成钢,李海霞,汤志宏,李淑红[4]（2019）在《东方田鼠与昆明小鼠胚胎成纤维细胞体外分离和培养比较研究》一文中研究指出为了进一步从细胞水平深入研究东方田鼠抗日本血吸虫机制提供试验材料,以及经济可靠地保存野生东方田鼠的生物活性细胞,试验采用胰蛋白酶消化法和组织块贴壁法,分别取妊娠12 d的东方田鼠和昆明小鼠胚胎组织,体外分离、培养成纤维细胞,观察比较不同培养方法、胰蛋白酶浓度、消化时间、传代次数及冻存复苏等因素对分离和培养两种胚胎成纤维细胞的影响,实时观察比较两种细胞生长特性。结果表明:组织块贴壁法和胰蛋白酶消化法均能在体外条件下较好地分离、培养两种胚胎成纤维细胞;采用0.125%胰蛋白酶37℃消化组织10 min,分离的细胞普遍密度大、活力好、贴壁细胞多、速度快,是实验室分离12 d胎龄东方田鼠与小鼠胚胎组织最佳胰酶浓度;昆明小鼠胚胎成纤维细胞较东方田鼠胚胎成纤维细胞足丝长而明显,细胞核较小;两种细胞冻存后生长及活率无显着差异;在含10%血清浓度培养体系中,东方田鼠胚胎成纤维细胞生长速率慢于昆明小鼠胚胎成纤维细胞,生理代数分别为8代和7代,其中2～5代增殖旺盛。说明东方田鼠和昆明小鼠胚胎成纤维细胞在体外分离方法上差异不显着,而两者在生物学特性方面存在一定种属差异。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年05期）
许金煌[5]（2019）在《胆固醇对体外分离培养的豚鼠胆囊cajal样间质细胞的影响》一文中研究指出目的:胆囊胆固醇结石是一种常见的消化系统疾病,其病因复杂,是多种因素综合作用的结果。常见的病因例如:饮食因素、遗传因素、胆汁成分的改变、胆囊动力障碍等都是国内外研究的热点。近年来,随着人们生活水平的提高,胆囊胆固醇结石的发病率也逐年上升,严重危害人类的健康。胆囊Cajal样间质细胞(interstitial Cajal-like cells,ICLCs)是胆囊的起搏细胞,参与胆囊产生的自发节律性电活动和自动节律性收缩活动,介导来自神经的兴奋性及抑制性神经递质效应,对维持胆囊动力具有重要作用。CG患者胆囊标本和CG动物模型均出现胆囊ICLCs数量的减少现象,而ICLCs数量减少的机制却仍不清楚。有些学者提出,CG患者胆囊出现ICLCs减少的原因可能是由于胆囊吸收过多的胆固醇引起的,这种说法是否正确仍有待证实。既往大多数关于胆囊ICLCs的研究都仅限于组织学水平,这限制了我们对CG发病机制的进一步研究。本研究拟通过原代培养豚鼠胆囊ICLCs,以及在细胞培养液中加入水溶性胆固醇,模拟CG患者胆囊ICLCs面对的高胆固醇环境,探讨胆固醇对ICLCs增殖、凋亡的影响。以及初步探讨胆固醇影响ICLCs增殖、凋亡的机制。研究方法:通过酶消化法消化豚鼠胆囊组织,分离培养豚鼠胆囊ICLCs,用c-kit免疫荧光染色鉴定ICLCs,在ICLCs培养液中加入含水溶性胆固醇的培养液模拟胆汁中胆固醇浓度过高的环境,cck-8法检测ICLCs的增殖率,流式细胞术检测ICLCs的凋亡率,western blot检测ICLCs c-kit蛋白的表达量、Real-time PCR检测ICLCs c-kit mRNA的表达水平。结果:用酶解法成功的分离了豚鼠胆囊ICLCs,并对其进行传代培养。细胞培养1周后,显微镜下观察可见:梭形的细胞较多,少数呈叁角形、圆形、椭圆形、星形,细胞核较大,细胞质较少,有2~3个突起,突起间可相互连接。随着培养时间的增加,细胞突起细长化且彼此间相互连接形成网络,形成典型的ICLCs形态特征。培养的细胞经传代3次,进行免疫荧光染色(即c-kit单克隆抗体及FITC标记的二抗处理)后呈c-kit阳性,表现为FITC绿色荧光,细胞核DAPI染色,表现为蓝色荧光,证实所培养的细胞为ICLCs。用含25mg/L、50mg/L、100mg/L质量浓度胆固醇的培养液培养ICLCs后,与对照组相比,ICLCs的增殖率明显下降(P<0.05);ICLCs的凋亡率明显增加(P<0.05);ICLCs c-kit蛋白、c-kit mRNA表达均明显下降(P<0.05)。结论:(1)胆固醇有抑制ICLCs增殖,以及促进ICLCs凋亡的作用,且胆固醇浓度越高,抑制ICLCs增殖的作用越明显,ICLCs的凋亡率也越高。(2)胆固醇能够抑制ICLCs c-kit蛋白表达,以及抑制ICLCs c-kit mRNA表达的作用。(3)CG动物模型胆囊ICLCs减少的原因可能是胆固醇抑制了c-kit/SCF信号通路的表达,使ICLCs生长发育变慢,以及使ICLCs凋亡增多,最终导致ICLCs的数量减少。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-02-01）
吕明,罗军,石恒波,田慧彬,王平[6]（2018）在《奶山羊成肌细胞体外分离培养及鉴定》一文中研究指出成肌细胞(myoblast)具有自我更新和多向分化的能力,对骨骼肌的再生和修复起着重要作用。为了建立奶山羊(Capra hircus)肌细胞的体外分离纯化、培养和鉴定的方法,了解其增殖和成肌特性,为奶山羊肌肉发育调控机理研究提供实验材料,本研究采集西农萨能奶山羊羔羊骨骼肌组织,采用I型胶原酶和胰酶两步酶消化法分离细胞,结合差速贴壁纯化得到成肌细胞,利用qRT-PCR和免疫荧光染色法对分离纯化后的成肌细胞进行进一步鉴定。细胞形态学观察结果显示,分离纯化后的成肌细胞呈梭形,生长状态良好;qRT-PCR和免疫荧光染色结果显示,生肌调节因子5(myogenic regulatory factor5, Myf5)和成肌决定因子(myogenic differentiation factor, MyoD)、结蛋白(desmin)呈阳性表达,纯化后的成肌细胞纯度大于95%;诱导分化后的成肌细胞能够相互融合形成肌管,成肌特异性标志蛋白肌球蛋白重链(myosin heavy chain, MYHC)呈阳性表达。本研究建立了奶山羊成肌细胞体外分离培养的方法,并成功获得了高纯度的具有增殖和成肌特性的成肌细胞,可用于奶山羊肌肉发育调控研究。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2018年11期）
王亚萍,孔祥平,刘光泽,卓丽,高洪波[7]（2018）在《GFP转基因小鼠胎肝干细胞体外分离培养及脾内移植》一文中研究指出背景:近年研究证实,干细胞移植的成功与否、移植后细胞功能的发挥均与体内微环境密切相关。正常生理情况下,肝脏不易接受外源性细胞,因此,在目前的细胞移植研究中,通常会先建立一个移植动物模型,通过造成宿主肝脏的损伤或降低宿主肝脏的免疫反应等方式,为外源细胞的植入和增殖创造一个良好的移植条件。目的:观察GFP转基因小鼠胎肝干细胞在脂质体包裹的二氯亚甲基二磷酸盐/倒千里光碱联合1/3肝切除(L-CL2MDP/RS/PH)模型大鼠肝脏内的定植和分布情况。方法:(1)以孕15 d GFP转基因小鼠为供体,分离培养胎肝干细胞,荧光显微镜观察GFP表达,并行免疫细胞化学鉴定;(2)将30只SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组腹腔注射倒千里光碱溶液(30 mg/kg,共2次,每次间隔2周),术前1 d每只大鼠静脉注射1 m L脂质体包裹的二氯亚甲基二磷酸盐(L-CL2MDP)溶液,行1/3部分肝脏切除后经脾内移植GFP转基因小鼠胎肝干细胞,对照组用生理盐水分别代替L-CL2MDP和倒千里光碱溶液,不进行1/3部分肝脏切除;(3)移植后3,15,30 d取出两组大鼠肝脏行冰冻切片,荧光显微镜下观察GFP阳性肝干细胞在大鼠肝脏的分布,并通过免疫组化染色方法检测抗小鼠C-Kit抗体在移植大鼠肝内的表达。结果与结论:(1)镜下观察分离的肝干细胞大小均匀,呈鹅卵石形态。培养5 d后细胞体积逐渐增大,呈类圆形或梭形,荧光显微镜下可见绿色荧光,免疫细胞化学检测第3代肝干细胞表达CD34、AFP;(2)胎肝干细胞移植后3 d在荧光显微镜下发现实验组大鼠肝内散在分布GFP阳性细胞,移植后30 d大鼠肝脏内仍可见GFP阳性表达;(3)移植后3,15,30 d在实验组大鼠肝脏组织可见C-Kit阳性细胞表达;(4)结果表明,GFP转基因小鼠胎肝干细胞成功移植于L-CL2MDP/RS/PH模型大鼠脾内,植入的细胞能够在大鼠肝脏中存活,并出现不同程度增殖。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年25期）
张树敏,廖秀冬,吕林,张丽阳,罗绪刚[8]（2018）在《肉鸡鸡胚十二指肠上皮细胞的体外分离、鉴定及其原代培养吸收模型的构建与评估》一文中研究指出本试验旨在评估十二指肠上皮细胞不同接种密度对细胞紧密连接性及细胞活力的影响,为建立肉鸡鸡胚体外原代培养十二指肠上皮细胞吸收模型选择最佳的细胞接种密度。试验采用单因子完全随机试验设计,共设3个组,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组肉鸡鸡胚十二指肠上皮细胞接种密度分别为2.90×10~6、6.25×10~6、8.75×10~6个/m L,每个组6个重复,共培养4 d。结果表明:1)刚分离的十二指肠上皮细胞团呈球形,且细胞团的大小均一,悬浮于培养液中,贴壁后细胞团开始向外伸展,逐渐铺成片,细胞之间界限清晰、贴壁均匀,呈单层"铺路石样"生长。2)经碱性磷酸酶染色,阳性试验组的十二指肠上皮细胞胞浆被染成了蓝黑色,阴性对照组的十二指肠上皮细胞不着色。3)在细胞培养的48和72 h,Ⅰ组和Ⅱ组细胞的跨膜电阻(TEER)值均满足大于300Ω·cm2的试验要求,酚红透过率均满足小于5%的试验要求,并且Ⅰ组细胞的TEER值显着高于Ⅱ组(P<0.05),细胞酚红透过率显着低于Ⅱ组(P>0.05)。4)在细胞培养的24和48 h,Ⅰ组细胞培养液中的乳酸脱氢酶(LDH)活力均显着低于Ⅱ组和Ⅲ组(P<0.05)。以上结果表明,细胞接种密度为2.90×10~6个/m L,培养时间为48 h时,细胞间界限清晰、生长状态良好、紧密连接性强,细胞活力最佳,说明原代培养肉鸡鸡胚十二指肠上皮细胞物质吸收模型构建成功,可为后续十二指肠上皮细胞的吸收规律及其分子机制的研究提供了良好的试验模型。(本文来源于《动物营养学报》期刊2018年08期）
郭俊,杨健,贺露,李伟,胡红梅[9]（2018）在《猪牙髓干细胞体外分离培养与分化研究》一文中研究指出目的探讨分离培养猪牙髓干细胞(s DPSCs)的方法,为下一步的研究及牙成体干细胞的应用提供理论基础。方法 6月龄猪磨牙获取牙髓;采用酶消化法获取s DPSCs,取第1代细胞为研究对象计算细胞集落形成率(CFU);采用免疫荧光等技术检测s DPSCs标记物;体外诱导细胞成骨、成脂分化。结果酶消化法获取的第1代s DPSCs的CFU-F为2~8 colonies/103;细胞贴壁生长,短梭形;体外可连续培养多代;s DPSCs碱性磷酸酶(ALP)、巢蛋白、波形蛋白阳性表达;Stro-1阳性率为75.4%,CD90为99.8%;CD24为42.6%;不表达CD34和牙本质涎蛋白(DSP);s DPSCs诱导后有DSP和ALP的表达;诱导条件下s DPSCs可向成牙本质细胞和脂肪细胞方向分化。结论采用酶消化培养法能够有效地分离得到s DPSCs;猪牙髓中存在牙髓干细胞并具有克隆繁殖能力和分化能力。(本文来源于《广东医学》期刊2018年11期）
王玉恒,索朗斯珠,强巴央宗,徐业芬,牛家强[10]（2018）在《西藏林芝地区牦牛卵泡颗粒细胞体外分离培养和形态观察》一文中研究指出旨在建立牦牛卵泡颗粒细胞模型以研究牦牛生殖生理机制。从林芝市牛屠宰场采集牦牛卵巢,并采用口吸管法在体视显微镜下分离卵巢表面直径为2~5 mm卵泡内的颗粒细胞,用于体外培养。结果表明:原代颗粒细胞培养12~48 h时处于潜伏期,此时细胞刚刚贴壁并且黏附不牢固,增殖分化速度较慢;培养72~96 h时,细胞进入指数增殖期,此时细胞多呈放射状,增殖分化速度最快;培养144 h时形成颗粒细胞单层;然而传代颗粒细胞生长速度较快,48 h后细胞进入指数增殖期,72 h后颗粒细胞生长至培养皿的90%左右,形成颗粒细胞单层。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2018年05期）
体外分离培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:大量针对骨关节炎细胞水平的研究仍集中在动物模型关节软骨细胞的体外培养。动物模型引发的退变效应与人骨关节炎的发生并不完全一致。如何利用人骨关节炎软骨组织构建体外细胞模型并研究其特征性蛋白变化趋势,是模拟体内骨关节炎软骨退变过程的关键。目的:探讨人骨关节炎软骨细胞的体外分离、培养方法,观察原代至第3代人骨关节软骨细胞的形态学特性和相关蛋白表达变化。方法:取6例因重度骨关节炎行关节置换术患者的废弃软骨组织(获得中国人民解放军总医院医学伦理委员会批准,伦理批号为S2017-23-7),男2例,女4例;年龄62-72岁,平均(68.3±3.39)岁,采用一步酶消化法(Ⅱ型胶原酶)分离培养人骨关节炎软骨细胞,并进行传代培养,从而构建体外人骨关节炎软骨细胞培养体系。倒置相差显微镜观察各代细胞形态;苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫荧光染色方法进行细胞鉴定。采用Western blot法检测各代软骨细胞于70%融合率时Col2a、Aggrecan与MMP-13的表达。结果与结论:经过Ⅱ型胶原酶消化后,培养1周左右可见组织块周围爬出散在的细胞,3周左右可传代进行下一步研究;形态学、苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色与Ⅱ型胶原免疫荧光染色证明培养出的细胞为人软骨细胞。第3代软骨细胞Col2a、Aggrecan的相对表达量与原代比较有明显降低(P<0.01),且随着培养代数增加表达逐渐降低;MMP-13随着培养代数的增加表达逐渐增强(P <0.01)。结果表明,Ⅱ型胶原酶一步消化法可成功从标本中分离出骨关节炎软骨细胞并传代培养。体外培养的骨关节炎软骨细胞去分化特性随着传代次数增加而逐渐增强,功能性蛋白表达整体下降。3代以内的软骨细胞符合人骨关节炎时软骨退变的表现,可能是用于实验研究的最佳选择。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
体外分离培养论文参考文献
[1].许金煌,范莹.胆固醇对体外分离培养的豚鼠胆囊Cajal样间质细胞的影响[J].中国临床研究.2019
[2].魏钰,魏民.人骨关节炎软骨细胞的体外分离与培养[J].中国组织工程研究.2019
[3].金鑫,张曼,王云鹤,魏方,温婧怡.绵羊瘤胃上皮细胞的体外分离培养、冻存及复苏方法[J].中国农业大学学报.2019
[4].黎欢,成钢,李海霞,汤志宏,李淑红.东方田鼠与昆明小鼠胚胎成纤维细胞体外分离和培养比较研究[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[5].许金煌.胆固醇对体外分离培养的豚鼠胆囊cajal样间质细胞的影响[D].中国医科大学.2019
[6].吕明,罗军,石恒波,田慧彬,王平.奶山羊成肌细胞体外分离培养及鉴定[J].农业生物技术学报.2018
[7].王亚萍,孔祥平,刘光泽,卓丽,高洪波.GFP转基因小鼠胎肝干细胞体外分离培养及脾内移植[J].中国组织工程研究.2018
[8].张树敏,廖秀冬,吕林,张丽阳,罗绪刚.肉鸡鸡胚十二指肠上皮细胞的体外分离、鉴定及其原代培养吸收模型的构建与评估[J].动物营养学报.2018
[9].郭俊,杨健,贺露,李伟,胡红梅.猪牙髓干细胞体外分离培养与分化研究[J].广东医学.2018
[10].王玉恒,索朗斯珠,强巴央宗,徐业芬,牛家强.西藏林芝地区牦牛卵泡颗粒细胞体外分离培养和形态观察[J].畜牧与兽医.2018
标签：Cajal样间质细胞; 胆固醇; 凋亡; 增殖;