双龙方干预骨髓间充质干细胞分化过程中代谢组学研究

论文摘要

双龙方是由丹参和人参两味药材所组成的中药复方配伍,具有“益气养血、活血通脉”的功能,适用于治疗冠心病、心绞痛和心肌梗死等心血管疾病。骨髓间充质干细胞（MSCs）在一定条件之下定向分化为心肌细胞,对细胞移植治疗心肌梗死有重要的意义。本论文在代谢组学的层面上,研究中药复方双龙方对大鼠骨髓间充质干细胞的干预结果,寻找细胞代谢物在诱导过程中的变化。为此我们先对复方的组分配伍（总丹酚酸、人参总皂苷）及成分配伍（Sal B、Rb1）进行化学分析,通过HPLC/MS的方法确定了其中的11种化学成分,明确复方当中的化学组成。然后又采用了离子对色谱法进行分离,离子阱质谱仪作检测,建立起分析MSCs代谢物的HPLC/MS方法,筛选出30种细胞代谢物,包括了核苷酸类、氨基酸类和糖代谢类,对其中的28种进行定量,并作了方法学考察。在上述的基础上,进行了细胞代谢物组学研究。考察了干细胞在第0、10、20、30和35天的分化情况,比较空白组、5-aza诱导组、双龙方组分组和双龙方成分组之间的差别,得到了初步结果。双龙方组分组和5-aza诱导组中,有5种代谢物（AMP、Tau、ADP、Glu和Thr）在诱导第35天时浓度水平接近,说明这两个组具有相似疗效,与实验室前有的结果相符合。体现出中药复方配伍的必要性和科学性,在一定程度上具有与西药相似的治疗效果。结果对双龙方干预MSCs分化中代谢物的变化情况提供了参考。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 前言
• 1.1 MSCs 及其分化研究
• 1.2 MSCs 的大分子研究
• 1.3 MSCs 的小分子研究
• 1.3.1 代谢物组学
• 1.3.2 细胞代谢物组学
• 1.4 中药复方药理的研究现状
• 1.4.1 中药复方研究思路
• 1.4.2 中药诱导MSCs 分化研究进展
• 1.4.3 双龙方及其研究现状
• 1.5 本论文的研究内容
• 第2章 双龙方有效组分成分分析研究
• 2.1 实验部分
• 2.1.1 试剂和药品
• 2.1.2 仪器和设备
• 2.1.3 液相分离条件
• 2.1.4 质谱条件
• 2.1.5 待测样品准备
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 双龙方成分配伍峰的指认
• 2.2.2 双龙方组分配伍峰的指认
• 2.2.3 双龙方组分配伍峰的推断
• 2.3 本章小结
• 第3章 MSCs 代谢物分析方法研究
• 3.1 实验部分
• 3.1.1 试剂和药品
• 3.1.2 仪器和设备
• 3.2 色谱/质谱方法的确定
• 3.2.1 流动相组成的确定
• 3.2.2 梯度洗脱条件的确定
• 3.2.3 质谱条件的确定
• 3.3 混合标准品各峰的指认
• 3.4 样品前处理方法的确定
• 3.4.1 一般的操作程序
• 3.4.2 提取步骤的确定
• 3.5 分析方法的确证
• 3.5.1 混合标准品的准备
• 3.5.2 检出限及定量限
• 3.5.3 标准曲线和线性范围
• 3.5.4 稳定性
• 3.5.5 精密度
• 3.5.6 回收率
• 3.6 本章小结
• 第4章 双龙方干预MSCs 分化过程研究
• 4.1 实验部分
• 4.1.1 试剂和药品
• 4.1.2 仪器和设备
• 4.1.3 溶液的配制
• 4.1.4 灭菌操作
• 4.1.5 实验动物
• 4.1.6 大鼠MSCs的提取及培养
• 4.1.7 实验设计及分组
• 4.1.8 细胞样品的取出
• 4.1.9 细胞样品的前处理
• 4.1.10 细胞样品的分析
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 细胞计数
• 4.2.2 各组代谢物浓度数据
• 4.2.3 PCA 聚类分析结果
• 4.2.4 样品代谢物浓度分析
• 4.2.5 小结
• 4.3 本章小结
• 第5章 结论
• 5.1 研究总结
• 5.2 需进一步开展的工作
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果