腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌细胞逆转耐药的体外实验研究

论文摘要

目的研究在腺病毒载体介导的RNA干扰ERCC1基因表达的基础上,联合顺铂作用于卵巢癌细胞敏感株SKOV3和顺铂耐药株SKOV3/DDP,观察此重组腺病毒（Ad-hTERT-ERCC1-siRNA）是否对卵巢癌细胞敏感株具有化疗增敏作用及对耐药株具有逆转耐药作用,以及其作用与药物剂量的关系,为逆转卵巢癌顺铂耐药提供实验依据,为临床改善卵巢癌患者的预后提供新方法。方法第一部分:采用直接感染法、台盼蓝活细胞计数、MTT、Hoechst染色法及流式细胞仪检测等方法,研究腺病毒载体介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌细胞敏感株SKOV3的生长抑制作用及其对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用。第二部分:采用直接感染法,应用台盼蓝活细胞计数法、MTT法、Hoechst染色法及流式细胞仪检测等方法,研究腺病毒载体介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌细胞顺铂耐药亚株SKOV3/DDP的逆转耐药作用。结果第一部分1.SKOV3细胞株顺铂IC50值为7.76μg/ml,腺病毒载体介导的RNA干扰ERCC1基因表达对SKOV3细胞生长有一定的抑制作用;2.Ad-hTERT-ERCC1-siRNA对SKOV3细胞顺铂敏感性的影响:与对照组相比,用1、10、50、80MOI的重组腺病毒感染后,对顺铂的敏感性分别增加了9.4%、16.4%、23.2%、33.5%,Ad-hTERT-ERCC1-siRNA能提高SKOV3细胞的顺铂敏感性,并呈剂量依赖性;3.Hoechst染色法观察,梯度滴度Ad-hTERT-ERCC1-siRNA联合顺铂作用于SKOV3细胞株,细胞凋亡显著增加;4.流式细胞仪分析发现,Ad-hTERT-ERCC1-siRNA感染并联合顺铂用药,G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加;细胞凋亡率进一步增加。第二部分1.SKOV3/DDP细胞株顺铂IC50值为13.93μg/ml,耐药指数为1.79,Ad-hTERT-ERCC1-siRNA对SKOV3/DDP细胞生长有一定程度抑制作用;2.Ad-hTERT-ERCC1-siRNA对SKOV3/DDP细胞顺铂耐药的影响:与对照组细胞相比,用1、10、50、80MOI的腺病毒感染后,对顺铂的敏感性分别增加了11.1%、16.7%、26.4%、33.5%。可见Ad-HTERT-ERCC1-siRNA能部分逆转SKOV3/DDP细胞的顺铂耐药性,并呈剂量依赖性;3.Hoechst染色法观察,梯度滴度Ad-hTERT-ERCC1-siRNA联合顺铂作用于SKOV3/DDP细胞株,细胞凋亡显著增加;4.流式细胞仪分析发现,Ad-hTERT-ERCC1-siRNA感染并联合顺铂用药G1期细胞比例增加,S期细胞比例增加;细胞凋亡率进一步增加。结论1.重组腺病毒Ad-hTERT-ERCC1-siRNA对卵巢癌细胞SKOV3及其顺铂耐药亚株SKOV3/DDP有一定程度生长抑制作用;2.重组腺病毒Ad-hTERT-ERCC1-siRNA可以增加SKOV3细胞对顺铂的敏感性,可以部分逆转SKOV3/DDP细胞对顺铂的耐药性,且与病毒滴度有关;3.重组腺病毒表达载体Ad-hTERT-ERCC1-siRNA以ERCC1基因为靶点,可通过干扰ERCC1基因表达、调节肿瘤细胞周期分布、诱导肿瘤细胞凋亡等途径而发挥增加SKOV3细胞顺铂敏感性、部分逆转SKOV3/DDP细胞顺铂耐药性的作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 一、腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌SKOV3细胞顺铂增敏作用的体外试验研究
• 对象和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 二、腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌SKOV3/DDP细胞逆转顺铂耐药作用的体外试验研究
• 对象和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 综述正文
• 综述参考文献
• 致谢