BCG试剂对血清白蛋白检测影响因素的探索*

关键词：血清白蛋白；BCG试剂；吸光度；比色法

人血浆白蛋白（albumin,ALB）是血浆含量最多的蛋白质［1］，是血浆中多种物质重要的结合物与运输蛋白，并且是维持血浆胶体渗透压的重要组分，临床上测定血清白蛋白具有重要意义[2]。因此，其检测是临床实验室的常规检测项目之一[3]，其常用检测的方法为溴甲酚绿法和溴甲酚紫法[4]。目前BCG法是临床实验室应用最广泛的一种测定清蛋白的染料结合法[5],ALB作为一种阳离子,结合阴离子染料BCG形成蓝绿色复合物,在628nm处有吸收峰,其吸光度与ALB浓度成正比[6]。且BCG试剂是一种PH指示剂，变色域为PH3.8（黄色）-5.4（蓝色）[7]，试剂的PH改变可使染料与白蛋白结合率改变。溴甲酚绿（BCG）法因其灵敏度高、操作简单、重复性好，能自动化等优点被广泛应用于临床实验室[8]。按姜旭淦主编的第2版《临床生物化学检验实验指导》可知，显色时间与PH值改变对溴甲酚绿法测定血清白蛋白结果有显著的影响。据文献显示BCG浓度对清白蛋白测定准确度也有明显的影响[9]。但目前还没有文献表明BCG试剂在室温条件下储存时间长短因素对血清白蛋白的检测结果是否有影响，为此我们设计了BCG试剂的贮存液与应用液在室温条件下储存时间对血清白蛋白测定进行探究，通过研究表明BCG试剂在室温条件下储存2年对血清白蛋白测定结果没有太大的影响。实验研究报告如下：

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验药品溴甲酚绿（产品批号：910411）琥珀酸（丁二酸，产品批号：20140302），氢氧化钠（产品批号：20140512），聚氧乙烯月桂醚（Brij-35）（产品批号：F20070110），质控血清（产品批号：152091），蛋白标准液（40g/L）（产品批号：07112）

1.1.2BCG试剂制备制备4种室温储存时间不同的BCG应用液（5）：（1）2012年配制的BCG试剂（室温下储存3年），编号为“1液”（2）2014年配制的BCG试剂（室温下储存2年），编号为“2液”（3）使用2012年配制的BCG贮存液（室温下储存3年）配制：在1L容量瓶内加蒸馏水约40ml，琥珀酸缓冲贮存液100ml，用吸管准确加入2012年配制的BCG贮存液8.0ml，加Brij-35贮存液2.5ml、叠氮钠贮存液2.5ml，最后加蒸馏水定容至1L，混匀。此溶液PH应为4.15±0.05.编号为“3液”（4）使用2015年新配制的BCG贮存液配制：在1L容量瓶内加蒸馏水约40ml，琥珀酸缓冲贮存液100ml，用吸管准确加入2015年新配制的BCG贮存液8.0ml，加Brij-35贮存液2.5ml、叠氮钠贮存液2.5ml，最后加蒸馏水定容至1L，混匀。此溶液PH应为4.15±0.05.编号为“4液”

1.2实验仪器722N可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司产）,电热恒温水浴箱（姜堰市新康医疗器械有限公司产）

1.3实验原理溴甲酚绿（BCG）在pH4.20的环境中，在有非离子去垢剂（Brij-35）存在时，可与清蛋白（albumin，Alb）结合形成蓝绿色复合物，在波长630nm处有吸收峰，其颜色的深浅在一定范围内与清蛋白含量成正比，与同样处理的清蛋白标准液比较，可求得血清中清蛋白含量[10]。

1.4实验方法血清白蛋白检测采用溴甲酚绿（BCG）方法。按书[5]P65。

表1室温储存时间不同的BCG应用液对血清白蛋白含量测定结果

BCG应用液项目1液

（12年）2液

（14年）3液

（旧BCG贮存液）4液

（新BCG贮存液）AS（30次测定平均值）0.6890.5750.6900.645AU（30次测定平均值）0.5120.5020.5030.559Alb（g/L）29.72434.92229.15934.667参考值（g/L）（35-55）21项生化非定值质控品

参考范围（Alb（溴甲酚绿法））单位XX±SDX±2SDg/L34.131.5-36.729.0-39.2

2.1四种BCG试剂实验结果

【计算】血清清蛋白（g/L）=测定管吸光度／标准管吸光度×蛋白标准液浓度（40g/L）[5]

图1室温储存不同时间的BCG应用液对白蛋白含量测定结果分析折线图

3讨论

根据使用4种室温储存时间不同的BCG试剂对血清白蛋白测定结果可以分析：（1）从使用四种不同的BCG试剂测定血清白蛋白的结果可以看出，根据储存时间的不同，所测血清白蛋白的浓度有波动，“1液”测定值较低，“2液”测定值升高，“3液”测定值较“1液”和“2液”均偏低，“4液”较“3液”相对升高，但波动范围都在X±2SD：29.0-39.2内，测定结果表明四种BCG应用液合格。（2）根据测定数据和图表分析，对比“4种室温储存时间不同的BCG试剂”对血清白蛋白测定的影响，“1液”和“3液”测定血清白蛋白的结果均偏低，“2液”和“4液”测定血清白蛋白的结果均在均值附近，相对“1液”和“3液”的测定结果表明，“2液”和“4液”的测定结果准确性较高，即试剂较稳定。

参考文献

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Reference

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[10]sunzhuhua,zhuyanhua.Discussiononthedeterminationofserumproteinchromogenictimebybromocresolgreen[J].Trafficmedicine,1997,11(2):260

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