论文摘要
目的观察不同浓度尿酸对体外培养的肾小管上皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)及活性氧族(ROS)的影响,探讨尿酸损害肾小管上皮细胞的可能机制。方法分离肾小管上皮细胞,将其分为对照组与尿酸干预组(尿酸干预组分0.1、0.2、0.4、0.8mmol/L共4个亚组)、NADPH酶抑制组,每组重复6孔；紫外分光光度法测定肾小管上皮细胞内NADPH酶蛋白水平；光泽精化学发光法测定肾小管上皮细胞内超氧阴离子(o)生成量；TUNEL法与琼脂糖凝胶电泳法检测肾小管上皮细胞凋亡。结果24h后,0.1mmol/L尿酸干预组NADPH酶蛋白水平与(?)生成量较对照组仅轻微增高,0.2、0.4、0.8mmol/L尿酸干预组NADPH酶蛋白水平与(?)生成量较对照均显著增高,差异有统计学意义(P<0.01)；对照组细胞均未形成明显的DNA凋亡梯带,0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.4mmol/L、0.8mmol/L尿酸干预组均可见明显的DNA凋亡梯带,0.4mmol/L、0.8mmol/L尿酸干预组DNA凋亡梯带较0.1mmol/L、0.2mmol/L尿酸干预组更为明显。TUNEL结果显示：对照组、0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.4mmol/L、0.8mmol/L尿酸干预组的凋亡率分别为(17.5±1.0)‰、(72.4±12.4)‰、(136.8±13.4)‰、(328.7±32.6)‰、(427.2±51.5)‰,0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.4mmol/L、0.8mmol/L尿酸干预组细胞凋亡率明显高于对照组(尸<0.01,n=6),各尿酸干预组之间细胞凋亡率随着尿酸干预浓度的增高而增高；相关分析发现肾小管上皮细胞凋亡率与肾小管上皮细胞内NADPH酶蛋白水平及(?)生成量显著正相关(丫=0.765,0.792；P<0.01)。结论肾小管上皮细胞在持续高尿酸的作用下,可激活细胞内NADPH酶蛋白表达,释放(?),启动氧化应激级联反应,使肾小管上皮细胞持续受损而导致肾小管上皮细胞凋亡增加。