多色荧光原位杂交技术应用于支气管刷检标本肺癌诊断的研究

论文摘要

背景与目的:基于形态学的传统细胞学技术在肺癌的诊断中具有重要作用,尤其是利用痰、支气管刷检物、胸腔积液等的细胞标本。但即使是最有经验的细胞学家,对某些形态学变化轻微的肿瘤细胞也难以给出最后诊断。鉴于非整倍体是肺癌最常见的特征之一,本研究采用间期细胞核多色荧光原位杂交技术（multicolor fluorescence in situ hybridization,M-FISH）检测肺癌细胞中扩增频率较高的染色体数口畸变情况,探讨M-FISH与传统细胞学相比在利用支气管刷检标本诊断肺癌中意义。方法:选取文献中报道较常出现增益的3、6、7、8、11、12及17号染色体,利用荧光素标记的特异性着丝粒探针,对17例手术切除的肺癌组织及其手术切端病理学提示正常的组织（N-T配对）标本,71例随机选取的来自原发性肺癌或转移性肺癌患者的支气管刷检标本,以及11例非肿瘤患者的支气管刷检标本间期细胞核进行M-FISH。以正常人外周血淋巴细胞作为验证探针特异性的对照,采用双盲法完成M-FISH实验并计数染色体数口畸变。根据17例手术切端病理学提示正常的组织标本中染色体增益或缺失比例,确定判断增益或缺失的标准均为20%。分析所检测的染色体非整倍体情况与临床参数的关系,比较利用支气管刷检标本M-FISH和细胞学检测肺癌细胞的灵敏度和特异性。结果:肺癌患者支气管刷检标本中染色体增益畸变率由高到低依次为3号76.0%（38/50）、7号61.8%（42/68）、6号48.1%（26/54）、12号45.9%（28/61）、8号45.0%（27/60）、11号44.1%（30/68）和17号41.2%（28/68）。肺癌组织标本中染色体增益畸变率由高到低依次为6号100.0%（11/11）、17号94.1%（16/17）、3号92.9%（13/14）、7号88.2%（15/17）、12号87.5%（14/16）、11号76.5%（13/17）及8号75.0%（12/16）。上述7种染色体畸变作为独立的因素,与患者性别和年龄均无统计学意义的相关性,而12、17号染色体多体分别与临床病理分期存在显著相关性（P＜0.05）。在支气管刷检标本及肺癌组织标本中增益畸变率均较高的为3、7、6、12及17号染色体,选取这五种染色体着丝粒探针中的任意四种检测肺癌的敏感性为61.1～71.2%,高于细胞学的55.4～55.9%,二者特异性均为100%,细胞学阴性的肺癌病例和细胞学疑似肺癌的病例中大多为FISH结果阳性;而仅少数FISH结果阴性的病例细胞学为阳性。通过支气管刷检标本FISH和细胞学联合检测可使敏感性提高到87.3～92.2%。结论:3、6、7、8、11、12及17号染色体在肺癌患者支气管刷检标本及肺癌组织中均存在较高的染色体畸变率;12、17号染色体可能成为肺癌患者判断预后的指标之一;联合四种着丝粒探针的M-FISH在支气管刷检标本中检测肺癌的灵敏度高于传统细胞学;对于临床上考虑为肺癌而传统细胞学提示阴性或疑似肺癌的病例,应用M-FISH可能显著提高支气管刷检标本检测肺癌的灵敏度。

论文目录

• 英文缩写对照表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 1. 材料
• 1.1. 标本
• 1.2. 探针的选择
• 1.3. 试剂及耗材
• 1.4. 溶液配制方案
• 1.5. 常用仪器
• 2. 方法
• 2.1. 正常人外周血淋巴细胞中期染色体的制备
• 2.2. FOB刷检标本间期细胞核片的制备
• 2.3. 探针标记
• 2.4. 配制杂交液
• 2.5. 间期细胞核片及中期染色体片杂交前的预处理
• 2.6. 杂交
• 2.7. 杂交信号检测
• 2.8. M-FISH图像的分析
• 2.9. 结果判断
• 2.10. 统计学分析
• 结果
• 1. 正常人外周血淋巴细胞FISH结果
• 2. 原发性肺癌手术切端组织间期细胞核FISH结果
• 3. 原发性肺癌组织间期细胞核FISH结果
• 4. 肺良性病变患者FOB刷检标本间期细胞核FISH结果
• 5. 肺癌患者FOB刷检标本间期细胞核FISH结果
• 6. 肺癌患者FOB刷检标本染色体畸变与临床病理参数关系
• 7. 肺癌患者FOB刷检标本各染色体畸变情况
• 8. FISH与细胞学比较
• 讨论
• 1. 细胞学
• 2. FISH技术
• 3. 间期细胞核FISH技术用于检测支气管刷检标本
• 4. M-FISH利用支气管刷检标本检测肺癌的应用展望
• 5. 进一步研究方向
• 结论
• 参考文献
• 文献综述: 肺癌染色体不平衡性
• 致谢