树莓叶黄酮类活性成分的分离与鉴定研究

论文摘要

树莓是一种新兴的第三代水果,由于其在营养保健方面的优势在国际市场上受到了热捧,树莓产品也非常畅销,而我国的野生树莓资源丰富,研究开发树莓产品具有绝对的资源优势。本文以树莓叶为研究对象,建立了乙醇提取、聚酰胺纯化、高效液相色谱-电喷雾离子源-离子阱多级质谱联用仪（HPLC-ESI-MSn）分离鉴定树莓叶中黄酮类活性成份的方法,对树莓的深层次开发进行了探索和初步的研究。实验结果表明树莓叶总黄酮的平均得率为0.4168%,精密度为3.10%,其精密度、重现性、稳定性良好；经聚酰胺树脂填充柱净化后的黄酮含量为20.17%,基本上满足了市场上对树莓叶黄酮类物质含量20%的要求。在对树莓叶黄酮的分离鉴定过程中,根据二极管阵列（PDA）紫外吸收峰、相对保留时间、一级以及多级质谱碎片信息,对树莓叶中的黄酮类活性成分进行了基本结构分析,并对植物中的黄酮类活性成分的质谱断裂机理进行了归纳和总结。这对于树莓叶中活性成分的开发应用和深层次加工具有重要的意义,同时对于植物中的黄酮类活性成分的鉴定研究提供了指导。采用65%乙醇/水溶液超声波辅助提取制备供试品溶液,聚酰股纯化黄酮；色谱柱为Platisil ODS （250mm×4.6mm,5μm; Dikma）;流动相为含0.1%乙酸的水（pH3.2）（A）和乙腈（B）；流速为0.5mL/min；柱温为30℃；进样方式为自动进样10μL;梯度洗脱条件如下：0-10min25%-35%B,10-13min35%B,13-20min35-75%B,20-25min70-25%B,25-40min25%B至初始比例；二极管阵列检测扫描波长为200-600nm;质谱采用负离子模式在质核比（m/z）为100-700范围内扫描；多级质谱分析采用35%的碰撞归一化能量。根据黄酮标准品的质潜裂解规律,高效液相色谱保留时间、多级质谱碎片信息,本论文总共鉴定出14个黄酮类化合物,其主要是山檞皮素和山奈酚衍生的糖苷类化合物。这14个化合物为：槲皮索-3-O-槐糖糖苷、侧皮素-3-O-半乳糖-鼠李糖苷、檞皮素-3-O-葡萄糖醛酸糖苷、槲皮素-3-O-半乳糖鼠李糖苷、檞皮素-3-O-阿拉伯吡喃糖苷、槲皮素-3-p-D-葡葡糖苷、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖、檞皮素-3-O-β-D-鼠李糖苷、山奈酚-3-O-β-阿拉伯糖苷、山奈酚-3-O-葡萄糖-鼠李糖苷、杨梅酮、檞皮素、山奈酚-3-p-葡萄糖醛酸糖苷、山奈酚。其中,山奈酚-3-O-β阿拉伯糖苷山奈酚-3-O-葡萄糖-鼠李糖苷是第一次在树莓中发现。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 树莓基本概述
• 1.1.1 树莓的形态及生态分布
• 1.1.2 树莓的资源开发
• 1.1.3 树莓的主要化学成分
• 1.2 树莓中黄酮类活性成分
• 1.2.1 黄酮类化合物概述
• 1.2.2 黄酮类化合物的理化性质
• 1.3 树莓中总黄酮的提取和分离鉴定方法
• 1.3.1 树莓中总黄酮的提取方法
• 1.3.2 总黄酮的测定方法
• 1.3.3 黄酮类活性成分的纯化
• 1.3.4 黄酮类活性成分的分离鉴定方法
• 1.4 本论文研究意义及研究内容
• 2 材料与方法
• 2.1 实验药品
• 2.2 实验仪器及材料
• 2.3 实验样品
• 2.4 试剂的配制
• 2.4.1 标准品贮备液的配制
• 2.4.2 标准品工作液的配制
• 2.5 实验条件
• 2.5.1 总黄酮含量的测定条件
• 2.5.2 总黄酮提取的实验条件
• 2.5.3 总黄酮纯化实验条件
• 2.5.4 分析树莓黄酮的仪器实验条件
• 2.6 方法学考察
• 3 结果与讨论
• 3.1 总黄酮含量的测定
• 3.2 黄酮提取实验条件的确定
• 3.2.1 提取溶剂的选择
• 3.2.2 总黄酮提取单因索实验结果
• 3.2.3 总黄酮提取正交实验结果
• 3.2.4 总黄酮提取方法学考察
• 3.3 总黄酮纯化实验条件的确定
• 3.3.1 聚酰胺填充柱的准备
• 3.3.2 聚酰胺填充柱纯化单因素实验结果
• 3.3.3 聚酰胺树脂纯化正交实验结果
• 3.3.4 聚酰胺树脂纯化方法学考察
• 3.4 总黄酮分离鉴定条件的优化
• 3.4.1 液相-质谱条件的优化
• 3.4.2 树莓中黄酮类化合物的鉴定
• 3.4.3 液相质谱方法学考察
• 4 结论
• 5 展望
• 6 参考文献
• 7 论文发表情况
• 8 致谢
• 附录