松花粉对几种脂肪代谢酶抑制作用的研究

论文摘要

马尾松花粉中富含人体所需的多种营养成分和酶、黄酮、核酸等生命活性物质，具有利尿，轻身，润心肺，除风湿等方面的作用。本文以马尾松花粉为原料，对马尾松花粉中的脂肪酶的最适反应条件进行测定；对松花粉进行水提及醇提分离纯化，得到的提取物分别作用于脂肪酶、脂肪酸合成酶及肉碱棕榈酰转移酶，得到如下的结论：1.马尾松花粉中脂肪酶最适反应条件的测定为研究松花粉中脂肪酶的最适反应条件，考察了温度（℃）、pH、底物、金属离子等因素对其酶活的影响。通过脂肪酶的催化水解作用，用95%乙醇终止反应，测定其酸价，进而求得酶活，选择出脂肪酶的最适反应条件。结果表明，最佳反应条件为：温度35℃，pH7.4，底物为三丁酸甘油酯，Ca2+、Fe3+、Mg2+、Fe2+会提高脂肪酶活力。2.松花粉提取物对脂肪酶活的影响以0.1mg/mL的奥利司他为阳性对照物，用三蒸水配制浓度为0、10、30、70、150、250（已比较难溶）mg/mL的松花粉水提物作用于脂肪酶，除在70mg/mL时表现出对脂肪酶活轻微的抑制作用外，花粉水提物对胰脂酶酶活基本无影响；以0.1mg/mL的奥利司他为阳性对照物，分别配制0、1、5、10、20、40mg/mL浓度的松花粉醇提物（DMSO溶解）溶液，进行酶活测定实验，与对照相比，松花粉醇提物对脂肪酶表现出抑制作用：在10mg/mL时抑制作用已相当明显，其半抑制常数为4.4mg/mL。测定不同加样顺序对酶活的影响，结果表明酶是先与抑制剂结合，从而阻止了酶与底物的结合，从而起到抑制作用的。通过对Lineweaver-Burk双倒数图和Dixon图的特征分析，表明松花粉醇提物对脂肪酶的抑制属于非竞争性抑制。求得松花粉醇提物的抑制剂常数为Ki=0.02，表明该抑制剂与酶的结合物很稳定。松花粉醇提物经离心，得沉淀与上清两种组分，经酶活测定得知上清对脂肪酶具有抑制作用；上清中加入石油醚，得到两种组分，橙黄色透明液体A1与黄褐色固体A2，对上清进行悬蒸浓缩得到油状液体。经酶活测定得知两种物质均对脂肪酶有抑制作用，但是A2颜色较深，对滴定结果有影响，故下面对A1进行分离纯化；波长241.00nm，流动相：34%乙醚：66%正己烷，对A1进行中压柱层析分离，共出现了六个峰，其中峰二、峰三与峰五比较明显。但峰一、峰二、峰三与峰四相离太近，分离的效果不是很好，故收集时将峰一、峰二与峰三收集在一起，称作组分B1，将峰五与峰六收集在一起，称为组分B2，通过甲醇冲柱，得到组分B3。组分B1、B2、B3进行脂肪酶活性分析，得出组分B1、B2、B3均对脂肪酶活具有抑制作用；乙醚：正己烷=1:9时，将组分B1进行中压柱层析，将峰一、峰二与峰三收集在一起，称为组分C1，峰四收集到的组分称为组分C2。对C1与C2进行酶活测定，组分C1与C2都对脂肪酶活具有抑制作用，但C1的抑制效果要好于C2；通过组分C1与C2的高效液相色谱（HPLC）分析，得出C1与C2都是一很杂的混合物。3松花粉提取物对脂肪酸合成酶活的影响从大鼠肝脏中提取脂肪酸合成酶，测得酶比活为2.1U/mg。选取质量浓度为100μg/mL的松花粉水提物与醇提物作用于脂肪酸合成酶，通过与水空白及阳性对照C75相比，松花粉水提物表现出对FAS显著的抑制作用，而醇提物则对FAS具有促进作用。4松花粉提取物对肉碱棕榈酰转移酶（CPT-1）活的影响大鼠心脏取血，离心后得血清，测得CPT-1的酶活为72.06IU/mL。选取质量浓度为100mg/mL的松花粉水提物与醇提物作用于CPT-1，通过与空白及阳性对照相比，对CPT-1都表现出抑制作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 综述
• 1 松花粉
• 1.1 松花粉的功效
• 1.2 松花粉与酸价
• 2 肥胖与治疗
• 2.1 肥胖产生的机制
• 2.2 肥胖症的治疗
• 第二章 不同因素对松花粉中脂肪酶活力的影响
• 1. 实验仪器
• 2. 材料与试剂
• 3. 实验用液
• 4. 方法步骤
• 5. 结果与讨论
• 6. 讨论
• 第三章 马尾松花粉水（醇）提物对脂肪酶活性的影响
• 1. 松花粉水（醇）物提取方法
• 1.1 实验仪器
• 1.2 材料与试剂
• 1.3 实验方法
• 2. 松花粉水（醇）提物对脂肪酶活的影响
• 2.1 实验仪器
• 2.2 材料与试剂
• 2.3 实验用液
• 2.4 胰脂肪酶抑制活性的测定
• 2.5 抑制类型的研究
• 2.6 统计学处理
• 3. 结果与分析
• 4. 讨论
• 第四章 松花粉醇提物中对脂肪酶活有抑制作用成分的分离纯化
• 1. 实验仪器
• 2. 材料与试剂
• 3. 分离纯化方法
• 4 讨论
• 第五章 脂肪酸合成酶（FAS）抑制剂的研究
• 1. 实验仪器
• 2. 材料与试剂
• 3. 实验用液
• 4. 实验方法
• 5. 统计学分析
• 6. 结果讨论
• 7. 讨论
• 第六章 松花粉提取物对肉碱棕榈酰转移酶（CPT-1）活性的研究
• 1. 实验材料与试剂
• 2. 实验仪器
• 3. 实验步骤
• 3.1 样本处理
• 3.2 酶活测定
• 3.3 松花粉提取物对酶活影响的测定
• 4. 统计学分析
• 5. 实验结果
• 5.1 标准曲线的制作
• 5.2 松花粉不同组分对CPT-1活性的影响
• 5.3 松花粉提取物半抑制浓度的测定
• 6. 讨论
• 总结
• 参考文献
• 致谢
• 发表文章