导读:本文包含了百日咳毒素亚单位论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:百日咳毒素,S1亚单位,截短片段,克隆
百日咳毒素亚单位论文文献综述
杨瑜,朱为,应通峰,黄帼英,徐帆洪[1]（2008）在《百日咳毒素S1亚单位截短片段的表达、纯化及初步应用》一文中研究指出目的表达并纯化百日咳毒素(PT)S1亚单位截短片段S146,以其制备抗体,初步建立检测PT的双抗体夹心ELISA法。方法PCR扩增S146基因,亚克隆至载体pUC18,鉴定正确后,插入表达载体pET16b,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用镍离子亲和层析柱纯化,复性后的蛋白免疫家兔,制备抗血清,纯化后作为包被抗体,建立检测PT的双抗体夹心ELISA法,并检测其特异性。结果表达的重组蛋白相对分子质量约为19000,主要存在于破菌沉淀中,表达量占菌体总蛋白的44%;纯化后蛋白纯度为94.5%;家兔抗血清可特异性识别天然PTSI;建立的双抗体夹心ELISA法特异性良好。结论已成功表达、纯化了PTS1亚单位截短片段S146,并以纯化的抗S146抗体作为包被抗体,初步建立了检测PT的双抗体夹心ELISA法,为研制特异性检测试剂和提供一种疫苗的质量控制方法奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2008年12期）
张晓丽,邹全明,章金勇,张卫军[2]（2007）在《百日咳毒素S1亚单位突变体在大肠杆菌中的表达及纯化》一文中研究指出目的克隆百日咳毒素S1亚单位,获得其突变体(S1/9K-129G,rS1),构建原核表达系统,并鉴定融合蛋白的特异性。方法采用PCR和重迭延伸扩增得到突变体,将其与pMD18-T连接,转化至大肠杆菌DH5α,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-T-rS1,经双酶切得到rS1活性结构域编码片段。将其插入pQE-30载体中,转化大肠杆菌M15株,经IPTG诱导表达。表达产物经镍离子柱纯化,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果PCR及重迭延伸获得了约700bp的目的基因片段,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27000左右的蛋白,Western blot检测能与兔抗百日咳毒素多价抗血清发生反应。结论成功表达并纯化了百日咳毒素S1亚单位突变体,为研制百日咳疫苗候补抗原的相关分子免疫学研究奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2007年04期）
马建红[3]（2005）在《编码百日咳毒素S1亚单位的DNA疫苗诱导的抗百日咳杆菌的保护作用》一文中研究指出百日咳毒素 ( PT)是百日咳杆菌的主要致病因子 ,由 5个亚单位组成 ,S1亚单位具有酶活性 ,而 S2～S5亚单位参与靶细胞的结合。研究发现抗 S1亚单位的单克隆抗体可以预防百日咳杆菌感染 ,源自S1亚单位的重组蛋白和合成肽能诱导机体产生抗PT的保护(本文来源于《国外医学(预防、诊断、治疗用生物制品分册)》期刊2005年02期）
王彭,赵敬杰,苏绍波,RachelCaspi[4]（2004）在《百日咳毒素B-亚单位在诱导小鼠自身免疫性疾病中的作用》一文中研究指出目的:探讨百日咳毒素(PT)B-亚单位(PT-B)对小鼠自身免疫性疾病模型视网膜-脉络膜炎(EAU)的发病诱导作用。方法:①应用C57BL/6品系小鼠,以牛视网膜结合蛋白(IRBP)为抗原诱发小鼠视网膜-脉络膜炎;②将以上小鼠分为6组,分别以PT、PT-B(4个剂量)及空白作为免疫佐剂,与IRBP同时注射;③21d后对眼球行病理切片以判断发病情况,同时诱导耳部迟发型变态反应(DTH),并测量耳叶厚度;④取腹股沟及髂窝引流淋巴结,制备T细胞悬液,行T-细胞增殖实验,并取培养液上清,测IFN-γ、IL-12p70蛋白的表达水平;⑤取脾细胞提取mRNA,行RT-PCR测定IL-12p40基因表达水平。结果:PT-B亚单位与全毒素PT一样,可诱导小鼠自身免疫性疾病视网膜-脉络膜炎,并引起相应的免疫应答反应(与空白对照组相比P<0.01)。所用的PT-B不含有内毒素LPS成分的污染。结论:PT-B亚单位是PT作为自身免疫性疾病诱导增强佐剂的主要有效成分。(本文来源于《山东大学学报(医学版)》期刊2004年02期）
杨晓明,乔瑞洁[5]（2003）在《重组百日咳毒素S1亚单位的纯化及免疫原性》一文中研究指出将重组百日咳毒素S1亚单位基因的质粒在DH5α和TOP10两株大肠杆菌中进行表达 ,并对表达产物进行了初步纯化。粗制的rS1免疫家兔所得血清 ,用HP—PT及 1B7—PT包被的ELISA测定效价 ,并做被动免疫保护试验。抗PT的抗体滴度为 1∶32 0 0 0。该抗rSl血清在小鼠被动免疫保护试验中 ,对百日咳杆菌 1832 3毒株进行脑腔攻击的被动免疫保护作用达到 10 0 %。证明rS1亚单位具有良好的抗原性和免疫原性 ,并与天然S1具有相同的抗原表位。(本文来源于《微生物学免疫学进展》期刊2003年04期）
乔瑞洁,杨晓明[6]（2003）在《百日咳毒素S1亚单位的表达及其免疫原性研究》一文中研究指出目的 研究百日咳毒素S1(Pertussis toxin s1 subunit)亚单位在大肠杆菌中的表达及其免疫学特性。方法 采用PCR法从百日咳杆菌染色体中获得S1亚单位的结构基因并克隆到质粒pCR2.1-TOPO中,转化宿主菌DH5α和TOPO10。用抗S1的单抗1B7检测表达产物。用粗制的重组S1(rS1)免疫小鼠,做主动免疫保护实验。rS1免疫家兔,检测rS1的免疫原性。并以家兔免疫血清在小鼠进行被动免疫保护实验。结果 rS1可在大肠杆菌中稳定高效表达,表达量分别占细胞总蛋白量的14％(DH5α)和24.2％(TOPO10)。rS1能被1B7识别,在小鼠主动免疫实验中,保护率可达56.3％。家兔免疫血清ELISA效价为1:32 000。抗rS1血清对小鼠被动的免疫保护率为100％。结论 rS1具有良好免疫原性,为百日咳基因工程疫苗或亚单位疫苗研制及百日咳免疫机理研究提供了依据。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2003年04期）
李庆雷,于康震,马丽英,王孝铭[7]（2000）在《百日咳毒素S1亚单位缺失分子的构建及其在重组杆状病毒中的表达》一文中研究指出目的：为探明校基端疏水区对百日咳毒素Ｓ１亚单位分泌性的影响，试图构建缺失羧基端疏水区的Ｓ１亚单位。方法：应用ＰＣＲ技术构建了６种不同信号序列修饰的缺失羧基端疏水区的Ｓ１亚单位编码基因，并使用重组杆状病毒（ｒＢＶ）技术实现了这些缺失Ｓ１亚单位（ｔＳ１）在昆虫细胞中的高水平表达。结果：这些缺失Ｓ１亚单位的表达量为每万个昆虫细胞１．０１～２．２５ｕｇ。细菌信号肽和流感病毒ＨＡ信号肽均能完整表达和正确剪切，但ＨＡ信号肽在昆虫细胞中的处理效率更高。结论：ｔＳ１亚单位缺失羧基端疏水区后在昆虫细胞中的表达量明显提高，这些ｔＳ１亚单位的异源性表达是由于信号肽剪切不全所导致，ｔＳ１分子表观分子量的漂移并不意味着信号肽剪切不正确。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2000年01期）
于康震,Ｂｕｒｎｅｔtｅ,Ｗ,Ｎ,Ｋａｓｌｏｗ,Ｈ,Ｒ,Ｙｉｌｍａ,Ｔ,Ｄ[8]（1999）在《分子修饰的重组百日咳毒素S1亚单位的生物学和免疫学特性》一文中研究指出目的：对重组杆状病毒表达的经多种信号序列修饰的天然和变异百日咳毒素（ＰＴ）Ｓ１亚单位（ｒＳ１）的生物学及免疫学特性作出评价。方法：应用生物化学和免疫学技术与方法对这些ｒＳ１的酶活性、分泌性和免疫原性等做了系统鉴定。结果：ｒＳ１变异子无可检出的酶活性；所有ｒＳ１均不能由细胞分泌，可从细胞膜组分中大量检出，但不能从可溶性胞浆蛋白组分或细胞培养上清中检出；ｒＳ１分子内部含有３个疏水性区域；ｒＳ１虽不能与Ｂ寡聚体结合形成ＰＴ全毒素，但均能诱导抗ＰＴ免疫应答。结论：这些ｒＳ１极可能以膜蛋白形式存在，其非分泌性与分子内部的疏水性区域有关；所有ｒＳ１均保持其免疫原性。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊1999年04期）
于康震,Ｂｕｒｎｅｔtｅ,ＷＮ,Ｋａｓｌｏｗ,ＨＲ,Ｍａｒ,ＶＬ,Ａｈｍａｄ,Ｓ[9]（1999）在《百日咳毒素S1亚单位的分子修饰及在重组杆状病毒中的表达》一文中研究指出目的：百日咳毒素既是百日咳杆菌的主要毒性因子，又是重要的保护性抗原，其Ｓ１亚单位具有ＡＤＰ核糖转移酶活性和免疫保护性决定簇。为高效表达前构建的一个丧失酶活性但仍保持保护决定簇的Ｓ１变异子，开展了本研究。方法：通过添加人流感病毒血凝素基因信号序列或嵌膜序列的方法，对天然和变异Ｓ１亚单位基因片段作了遗传学修饰。然后使用重组杆状病毒技术使这些Ｓ１亚单位在昆虫细胞和昆虫幼虫中实现了高水平表达。结果：这些重组Ｓ１的表达水平介于每万个昆虫卵细胞０１８～１９３μｇ或每只昆虫幼虫０４６～４９８ｍｇ之间。天然信号肽和ＨＡ信号肽均可完整表达，但后者的切割效率（６１％～８１％）比前者（１６％～１９％）更高。所有带信号肽的Ｓ１亚单位均呈异质性表达（双带）。结论：重组Ｓ１亚单位的表达是高效和正确的，表达的异质性是由于信号肽切割不完全的缘故。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊1999年02期）
江丽君[10]（1993）在《表达重组百日咳毒素S1亚单位的鼠伤寒杆菌aroA突变株、伤寒杆菌Ty21a株及侵袭性大肠杆菌株口服免疫小鼠的特异性肺粘膜及全身免疫应答》一文中研究指出百日咳毒素(PT)是百日咳致病因子,也是用于制备新一代百日咳菌苗的主要保护性组分。抗百日咳免疫的传统途径是肌肉注射,主要引起全身性体液免疫。近年人们对口服具有重组百日咳组分的弱毒活菌苗引起的粘膜免疫进行了研究。作者报告了用表达重组百日咳毒素S1亚单位的口服弱毒活菌苗株免疫小鼠所产生的全身及肺粘膜免疫应答的结(本文来源于《国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册》期刊1993年04期）
百日咳毒素亚单位论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的克隆百日咳毒素S1亚单位,获得其突变体(S1/9K-129G,rS1),构建原核表达系统,并鉴定融合蛋白的特异性。方法采用PCR和重迭延伸扩增得到突变体,将其与pMD18-T连接,转化至大肠杆菌DH5α,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-T-rS1,经双酶切得到rS1活性结构域编码片段。将其插入pQE-30载体中,转化大肠杆菌M15株,经IPTG诱导表达。表达产物经镍离子柱纯化,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果PCR及重迭延伸获得了约700bp的目的基因片段,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27000左右的蛋白,Western blot检测能与兔抗百日咳毒素多价抗血清发生反应。结论成功表达并纯化了百日咳毒素S1亚单位突变体,为研制百日咳疫苗候补抗原的相关分子免疫学研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
百日咳毒素亚单位论文参考文献
[1].杨瑜,朱为,应通峰,黄帼英,徐帆洪.百日咳毒素S1亚单位截短片段的表达、纯化及初步应用[J].中国生物制品学杂志.2008
[2].张晓丽,邹全明,章金勇,张卫军.百日咳毒素S1亚单位突变体在大肠杆菌中的表达及纯化[J].中国生物制品学杂志.2007
[3].马建红.编码百日咳毒素S1亚单位的DNA疫苗诱导的抗百日咳杆菌的保护作用[J].国外医学(预防、诊断、治疗用生物制品分册).2005
[4].王彭,赵敬杰,苏绍波,RachelCaspi.百日咳毒素B-亚单位在诱导小鼠自身免疫性疾病中的作用[J].山东大学学报(医学版).2004
[5].杨晓明,乔瑞洁.重组百日咳毒素S1亚单位的纯化及免疫原性[J].微生物学免疫学进展.2003
[6].乔瑞洁,杨晓明.百日咳毒素S1亚单位的表达及其免疫原性研究[J].中国生物制品学杂志.2003
[7].李庆雷,于康震,马丽英,王孝铭.百日咳毒素S1亚单位缺失分子的构建及其在重组杆状病毒中的表达[J].中国免疫学杂志.2000
[8].于康震,Ｂｕｒｎｅｔtｅ,Ｗ,Ｎ,Ｋａｓｌｏｗ,Ｈ,Ｒ,Ｙｉｌｍａ,Ｔ,Ｄ.分子修饰的重组百日咳毒素S1亚单位的生物学和免疫学特性[J].中国免疫学杂志.1999
[9].于康震,Ｂｕｒｎｅｔtｅ,ＷＮ,Ｋａｓｌｏｗ,ＨＲ,Ｍａｒ,ＶＬ,Ａｈｍａｄ,Ｓ.百日咳毒素S1亚单位的分子修饰及在重组杆状病毒中的表达[J].中国免疫学杂志.1999
[10].江丽君.表达重组百日咳毒素S1亚单位的鼠伤寒杆菌aroA突变株、伤寒杆菌Ty21a株及侵袭性大肠杆菌株口服免疫小鼠的特异性肺粘膜及全身免疫应答[J].国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册.1993