论文摘要
脂联素（adiponectin）是脂肪细胞特异分泌的血浆蛋白,它与胰岛素抵抗、动脉粥样硬化等密切相关,检测adiponectin在血中的含量是研究其生理学功能及调控的手段之一,对于预测某些疾病的发生、发展有一定的意义。另外,由于adiponectin的活性主要集中在其球状区（gadiponectin）,而可溶蛋白又较包涵体有可能形成正确的折叠,从而具有一定的生物学活性,所以对adiponectin及gadiponectin的可溶表达将为其功能和作用机制的研究奠定基础,同时还能进一步制备ELISA检测所需的针对不同抗原表位的单、多克隆抗体。目前,国外检测人血adiponectin含量的方法主要有ELISA及RIA两种,其中ELISA大多采用生物素-亲和素信号放大系统,操作相对烦琐,检测周期较长,而国内尚无此类成套试剂。 目的:我们试图建立一简便、快捷的检测人血中adiponectin含量的ELISA方法,检测Ⅱ型糖尿病患者及健康体检者血中adiponectin的变化;并试图克隆表达有生物学活性的adiponectin及gadiponectin蛋白,并制备多克隆抗体,以利下一步进一步优化相关检测方法。 方法:用纯化的大肠杆菌重组表达包涵体adiponectin,免疫家兔和Balb/C小鼠分别制备多克隆和单克隆抗人adiponectin抗体,纯化后,用单抗包被微孔板,多抗标上辣根过氧化物酶,同时制备了一种新型血清或血浆样品稀释液,双抗体夹心法检测adiponectin,绘制标准曲线,检测Ⅱ型糖尿病和健康体检者血标本中adiponectin的含量,并进行统计学分析。为在此基础上进一步优化检测方法,我们以pQE30-adiponectin质粒为模板,PCR分别扩增adiponectin及gadiponectin DNA,并插入pGEX-4T-2表达载体,转化入BL21大肠杆菌,在25℃使用IPTG诱导,进行可溶性表达。可溶表达的蛋白经GSTrap柱亲和纯化后免疫家兔,制备多抗,利用Western blot鉴定多抗与人血清中adiponectin的反应性。使用肝癌细胞和外周血单个核细胞对可溶表达蛋白进行体外生物学活性鉴定。 结果:我们建立的ELISA系统的灵敏度为0.5μg/ml,板内、板间的精密度<8%。血清检测线性关系较好,准确性在88%-108%。新研制的血清或血浆
论文目录
相关论文文献
- [1].血清脂联素水平与轻度认知功能障碍的相关性研究[J]. 医学信息 2018(10)
- [2].呼吸机相关性肺炎血清脂联素水平变化的临床意义[J]. 临床误诊误治 2017(03)
- [3].阿尔茨海默病患者血清脂联素水平与认知功能的相关性[J]. 南方医科大学学报 2017(04)
- [4].2型糖尿病视网膜病变患者血清脂联素影响因素分析[J]. 糖尿病新世界 2016(14)
- [5].血清脂联素水平与子宫内膜癌的关系分析[J]. 中国实用医药 2015(05)
- [6].急性脑梗死患者血清脂联素与炎症因子的相关性[J]. 检验医学与临床 2015(02)
- [7].子宫内膜癌患者血清脂联素水平变化及意义探讨[J]. 中国民康医学 2015(06)
- [8].足月新生儿全身炎性反应综合征血清脂联素检测169例[J]. 中国医刊 2011(05)
- [9].自发性高血压大鼠血清脂联素水平与左室舒张功能的关系[J]. 暨南大学学报(自然科学与医学版) 2015(05)
- [10].食管癌患者血清脂联素水平变化及意义[J]. 山东医药 2013(30)
- [11].社区获得性肺炎患者中血清脂联素水平的变化[J]. 临床肺科杂志 2017(01)
- [12].稽留流产患者血清脂联素的检测及临床意义[J]. 临床医学工程 2017(03)
- [13].2型糖尿病视网膜病变患者血清脂联素与VEGF水平的变化及意义[J]. 临床输血与检验 2017(02)
- [14].阻塞性睡眠呼吸暂停合并血糖异常患者血清脂联素水平分析[J]. 中国全科医学 2016(08)
- [15].早产儿血清脂联素与骨密度的关系[J]. 中国当代儿科杂志 2015(01)
- [16].2型糖尿病视网膜病变患者血清脂联素影响因素分析[J]. 中外医学研究 2015(09)
- [17].溃疡性结肠炎患者血清脂联素水平变化及意义[J]. 河北医药 2015(10)
- [18].绝经后女性血清脂联素与冠心病的相关性[J]. 临床荟萃 2015(06)
- [19].血清脂联素在妊娠期高血压疾病中的变化及其与胰岛素抵抗的关系[J]. 实用临床医药杂志 2014(03)
- [20].血清脂联素在新生儿缺血缺氧性脑病中的诊疗价值[J]. 中华全科医学 2014(01)
- [21].血清脂联素在妊娠期高血压疾病中的变化及其与胰岛素抵抗的关系[J]. 华南国防医学杂志 2014(04)
- [22].溃疡性结肠炎血清脂联素与炎症因子相关性[J]. 中国医药科学 2014(13)
- [23].45例阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者血清脂联素水平分析[J]. 重庆医学 2012(25)
- [24].血清脂联素与脑梗死的关系研究[J]. 北华大学学报(自然科学版) 2012(06)
- [25].脑梗死患者血清脂联素水平变化及临床意义[J]. 实用医学杂志 2012(23)
- [26].急性脑梗死血清脂联素的变化及检验意义[J]. 中国社区医师(医学专业) 2011(17)
- [27].血清脂联素和IL-10检测在新生儿缺氧缺血性脑病中的诊断价值[J]. 国际检验医学杂志 2011(16)
- [28].非酒精性脂肪性肝病患者血清脂联素的检测意义[J]. 实用肝脏病杂志 2011(06)
- [29].脑梗死患者血清脂联素水平变化的相关性研究[J]. 中华老年心脑血管病杂志 2011(01)
- [30].原发性肾病综合征患者血清脂联素水平分析[J]. 中国现代药物应用 2010(04)
标签：酶联素论文; 酶联免疫吸附测定论文; 型糖尿病论文; 脂联素球状区论文; 可溶表达论文;