HERG在不同分类骨肿瘤中的表达及其对骨肉瘤细胞系增殖影响的研究

论文摘要

背景HERG （Human ether-à-gò-gò-related gene）最早在豚鼠心肌细胞中被发现,之后发现其存在于多种不同种类动物的心肌细胞中。HERG基因是进化保守的、电压门控外向整流钾离子通道的EAG （ether-à-gò-gò）家族成员之一,其编码的HERG钾通道是一种特殊类型的钾通道,具有内向整流特性。大量研究表明,HERG选择性表达于多种组织来源的肿瘤细胞,对肿瘤的生物学行为产生广泛的影响,与肿瘤细胞增殖、凋亡、分化及侵袭性密切相关,而在相应来源的正常细胞中不表达。其在肿瘤中的选择性表达可能代表了肿瘤细胞生长和肿瘤发展的有利因素,具有潜在的重要临床应用价值。最近,阻断钾离子通道对影响肿瘤细胞增殖情况的研究已经成为热点,HERG有可能通过其表达的电压门控性钾离子通道,影响肿瘤细胞的膜电位,从而有助于肿瘤细胞的存活和增殖,但具体机制尚不明了,另外其在骨科常见肿瘤中的表达情况及其与骨科恶性肿瘤细胞增殖的关系,尚缺乏充足的研究。目的本研究旨在探讨HERG在不同分类骨科常见肿瘤组织标本及其在骨肉瘤细胞系MG-63、SOSP-9607、Saos-2中的表达情况,分析HERG在骨肉瘤细胞系及临床标本中的表达与肿瘤病人临床病理学特征之间有无关联,探索HERG蛋白在不同骨肿瘤中的表达水平,以探求其与肿瘤分化程度,恶性程度之间的关系。同时验证对其抑制可对骨肉瘤细胞系增殖产生的影响。以期为未来骨肿瘤的临床诊断与治疗,尤其是化疗能够有一定的指导性作用。方法1、经医学伦理委员会通过和病人同意,根据常见骨肿瘤分类表选取临床骨肿瘤病例组织标本60例,归纳整理。2、相同病例经组织切片,免疫组化染色,镜下观察HERG表达水平。3、分别提取临床各个标本组织mRNA,RT-PCR方法观察其HERG表达水平差异。4、临床组织标本提取总蛋白,Western blot观察其HERG蛋白表达水平。5、复苏培养骨肉瘤细胞系MG63、SOSP-9607、Saos-2,提取mRNA,RT-PCR方法检测其HERG表达水平。6、非特异性钾离子通道抑制剂4-AP,HERG抑制剂E-4031不同浓度作用于三株细胞系,MTT法检测其增殖变化。结果1、临床标本资料经归纳整理,得到病例共60例,经我科手术室采集于2007年-2009年。其中男性38例,女性22例。经分析归纳整理,其中良性25例,恶性35例,详情见下文。2、免疫组化染色显示:不同恶性程度的肿瘤HERG的表达水平和位置有所不同,正常骨组织中不表达。3、RT-PCR结果显示:在半定量程序帮助下,可观察到HERG在正常骨组织中无表达,而其mRNA在临床标本中表达水平与肿瘤起源、恶性程度有关的结果。4、Western Blot显示蛋白水平表达与肿瘤恶性程度有关。5、RT-PCR显示:骨肉瘤细胞系MG63、SOSP-9607、Saos-2中HERG均有较高程度的表达。6、将不同浓度的通道抑制剂分别加入三株人骨肉瘤细胞系培养基中,培养48h后,MTT法检测各组A值的变化,可以评价不同的钾离子通道抑制剂对人骨肉瘤细胞生长的抑制作用,结果是特异性的HERG通道抑制剂E—4031对三株骨肉瘤细胞系的增殖没有明显的影响,而非特性的Kv通道抑制剂4-AP药物浓度在3 mmol和5 mmol时对细胞增殖影响明显,有显著性意义（P <0. 01）。结论HERG参与了许多骨肿瘤的发生、生长与演变,其表达水平随着肿瘤的起源不同,恶性程度不同而存在差异,许多骨肿瘤都是HERG基因表达的潜在靶点。而在良性或低度恶性的肿瘤中,HERG不表达或者低度表达。只有在为数不多的少数几种良性病变中有较低程度的表达。而在骨肉瘤细胞系MG63、SOSP-9607、Saos-2中HERG均有较高水平的表达,而部分钾离子通道抑制剂可明显抑制此三株肿瘤细胞系的增殖。证明了HERG与骨肿瘤起源、增殖、及肿瘤的恶性程度有密切关系。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 实验一 HERG 在正常骨组织、不同恶性程度骨肿瘤的表达的研究
• 引言
• 1 实验材料
• 2 实验步骤
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二 HERG 骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤细胞系增殖的影响
• 引言
• 1 实验材料
• 2 实验步骤
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢