Fasudil治疗EAE的潜能与抗炎作用

论文摘要

目的：本实验应用盐酸法舒地尔（Fasudil hydrochloride）在疾病发生和发展的不同阶段治疗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽（myelin oligodendrocyte glycoprotein peptides35-55, MOG35-55）诱导的C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmuneencephalomyelitis, EAE）模型，观察各组小鼠临床症状、病理变化，并检测脑CD4+T细胞的浸润以及脊髓和脑中p-MYPT1和NF-κB的表达，为今后临床治疗MS提供理论和实验依据。方法：雌性C57BL/6小鼠，随机分为EAE对照组、Fasudil晚期治疗组和Fasudil早期治疗组，每组14只。采用MOG35-55诱导慢性EAE模型，Fasudil早期治疗组和晚期治疗组分别在免疫后第3天（p.i.3）和症状出现时，腹腔注射Fasudil，连续至免疫后第27天（p.i.27）。从免疫当日（p.i.0）开始观察小鼠体重变化，并按国际通用标准评定临床症状。免疫后28天（p.i.28）处死小鼠，取脑和脊髓组织，进行HE和CD4+T细胞染色，同时Western blot检测各组脑和脊髓组织磷酸化肌球蛋白磷酸酶（p-MYPT1）和核因子（NF-κB）的表达，实验数据采用GraphPad Prism 4统计软件进行分析处理。结果：1. Fasudil可延缓EAE发生，改善EAE症状。EAE小鼠从免疫后第11天（p.i.11）开始相继发病。首先出现精神萎靡、小鼠尾部肌张力由降低到逐渐消失、双侧后肢无力甚至瘫痪，继而动物以双后肢拖于地面，足背贴地，爬行时双上肢剑突以下部分着地，同时伴有大、小便失禁，严重者可见四肢瘫痪，不能主动翻身，最高临床症状评分达4分。EAE对照组14只小鼠全部发病（100%），没有死亡；平均起病时间和平均高峰期临床评分分别为（13.07±1.90）和（2.46±1.08）。晚期治疗组小鼠平均最高临床评分（1.64±1.10，p＜0.05）,Fasudil早期治疗组小鼠平均最高临床评分仅（0.39±0.79，p＜0.01）。EAE临床症状加重的同时伴随体重的减轻，体重变化结果显示Fasudil早期治疗组和晚期治疗组改善临床症状的同时减少了体重的减轻（p值分别＜0.01和＜0.05）。2. Fasudil减轻CNS炎性浸润。HE染色显示临床症状较重的EAE对照组小鼠脊髓呈现大量炎性细胞浸润，尤以腰膨大处炎性细胞浸润更为明显。与此相反，Fasudil晚期治疗可以有效抑制脊髓炎性细胞浸润，而Fasudil早期治疗则可以显著地减少小鼠脊髓内的炎性细胞。与HE染色相一致，Fasudil晚期治疗有效抑制脑CD4+T细胞浸润，而Fasudil早期治疗则显著地抑制小鼠脑内的CD4+T细胞浸润。3. Fasudil抑制EAE小鼠脊髓和脑p-MYPT1的表达。EAE对照组小鼠脊髓中p-MYPT1表达明显高于脑。Fasudil早期治疗和晚期治疗均显著地抑制脊髓内p-MYPT1的表达（p值均＜0.01）；脑内p-MYPT1蛋白表达相对较低，与EAE对照组比较, Fasudil早期治疗能抑制脑内p-MYPT1的表达（p＜0.05）；而晚期治疗组则轻微减低p-MYPT1表达，但无统计学意义（p＞0.05）4. Fasudil降低EAE小鼠脊髓和脑NF-κB的水平。EAE对照组小鼠脊髓中NF-κB明显高于脑。与EAE对照小鼠比较，Fasudil晚期治疗和早期治疗均可降低脊髓NF-κB的水平（p值分别为<0.05和<0.01），但早期治疗效果更为显著；脑内NF-κB的表达比脊髓稍低,Fasudil晚期治疗和早期治疗均可轻微抑制脑NF-κB水平，但无统计学意义（p＞0.05）。结论：Fasudil对EAE有治疗作用，早期治疗效果更明显。Fasudil对EAE的治疗效果可能与抑制中枢神经系统炎性细胞浸润、p-MYPT1和NF-κB的表达有关，从而改善炎性细胞因子引起的炎症微环境，达到治疗和预防EAE的发生和发展。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩略词表
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 统计学处理
• 第三章 结果
• 3.1 临床情况
• 3.2 病理改变
• 3.3 脑和脊髓 p-MYPT1 表达
• 3.4 脑和脊髓 NF-κB 的测定
• 第四章 讨论
• 4.1 EAE 模型的成功诱导
• 4.2 ROCK 信号途径与 EAE
• 4.3 炎症机制在 EAE 发病中的作用
• 4.4 NF-ΚB 在 EAE 免疫和炎症反应中的作用
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢