论文摘要
目的 探讨局部应用以复制缺陷型腺病毒为载体的血管内皮生长因子（Ad—VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（Ad—bFGF）联合应用基因治疗对大鼠随意缺血皮瓣生存的影响,以观察两者是否有协同作用。方法 实验动物选用50只SD大鼠,体重350～400克,普通级,雌雄不论,以标准全价饲料在实验室分笼喂养,以使其适应实验室环境。将大鼠随机分成五组,每组10只,2.5%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（40mg/kg）。四肢固定后,背部8%硫化钠脱毛、消毒。于大鼠背部正中设计蒂在尾侧的随意皮瓣,皮瓣的长宽为8cm×2cm,蒂部位于髂嵴水平。于皮瓣远端真皮下分别注射Ad-VEGF&Ad—bFGF（10只目的基因组）,Ad-VEGF（10只基因对照组）,Ad—bFGF（10只基因对照组）Ad-GFP（10只绿色荧光蛋白基因对照组）,PBS（10只磷酸盐缓冲液空白对照组）。48小时后重新麻醉大鼠,按原设计掀起皮瓣,于深筋膜下钝性分离至皮瓣蒂部,活动性出血予以严格止血,原位用5“O”丝线间断缝合,保证皮肤对合良好,术后单笼饲养7天,观察皮瓣的成活情况,测量皮瓣的成活面积、计算成活率,并采集组织行免疫组化,组织学检查等。观察单位面积的微血管计数、光镜观察组织愈合情况。结果5组中Ad-VEGF&Ad-bFGF组皮瓣成活率最高为（78.18±1.81%）,与Ad-VEGF对照组（64.67±3.08%）、Ad-bFGF对照组（65.57±3.13%）有显著性差异（P<0.01）。Ad-VEGF组与Ad-bFGF组间无显著差异性,但与Ad-GFP（50.27±1.75%）组及PBS（49.62±1.99%）组间有显著性差异（P<0.01）。免疫组化基因转染组毛细血管周围VEGF、bFGF沉积,组织切片微血管密度,单位面积微血管计数显示VEGF&bFGF组最多,明显高于对照组。结论 复制缺陷型腺病毒为载体介导的基因转导,局部皮下联合注射Ad-VEGF和Ad—bFGF,二者有协同作用,可诱导局部VEGF和bFGF蛋白表达,两者合用能减少用药量,更有效促进新生血管的形成,增加皮瓣的血运,提高缺血皮瓣的成活面积,是一种简单有效的基因治疗方法。
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