新型CpG免疫刺激分子的构建及其免疫活性研究

论文摘要

为探索安全高效的新型动物分子免疫增强剂,本实验设计了一新型CpG寡聚脱氧核苷酸（oligodeoxynucleotide,ODN）,包含11个CpG基序,同时设计一对引物,在其两端引入PstⅠ酶切位点。应用PCR技术扩增CpG ODN,回收纯化后以MTT法体外检测其对动物血液淋巴细胞的刺激增殖活性。结果发现此CpG ODN能显著刺激动物血液淋巴细胞的增殖,具有较强的免疫刺激活性。用离子交联法制备了壳聚糖纳米颗粒（chitosan nanoparticles,CNP）,探索了CNP包装CpG和介导DNA转染动物细胞的特征。用此CNP包裹CpG ODN,联合副伤寒疫苗或单独接种21日龄昆明小鼠后,每周尾静脉采血用ELISA分析免疫小鼠IgG、IgA、IgM、IL2、IL4和IL6水平,检测淋巴细胞、单核细胞、粒细胞和白细胞数量的变化,,观察此CpG ODN及其壳聚糖纳米颗粒包装后对小鼠免疫应答及免疫保护的调节作用。实验结果发现:CpG及其CNP包装组的各项体液和细胞免疫指标较对照组均显著提高（P<0.05）,沙门氏菌攻毒结果表明该CpG显著增强小鼠对沙门氏菌感染的免疫抵抗力,提高其免疫保护率。接着将此CpG用PstⅠ酶切后与质粒VR1012连接,构建新型免疫刺激分子CpG-VR1012。酶切鉴定结果表明CpG分子与VR1012连接成功。同样制备壳聚糖纳米颗粒并免疫小鼠。实验结果发现:CpG-VR1012及其CNP接种小鼠的体液免疫机能较对照组显著增强,其血清中IL-2和IL-4、IL-6含量显著高于对照组,外周血液的白细

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 新型 CpG寡聚脱氧核苷酸的制备及其体内外活性的研究
• 摘要
• 1 引言
• 2 材料和方法
• 3 结果
• 3.1 PCR扩增产物的鉴定
• 3.2 CpG体外刺激动物血液免疫细胞增殖反应结果
• 3.3 纳米粒的形态、粒径及zeta电位
• 3.4 凝胶阻滞分析
• 3.5 免疫小鼠血清 IgG、IgM、IgA含量测定
• 3.6 免疫小鼠特异性抗体含量侧定
• 3.7 血清细胞因子含量测定
• 3.8 免疫小鼠外周血免疫细胞数量的动态变化
• 3.9. 小鼠攻毒结果
• 4. 讨论
• 第二部分 新型免疫刺激分子VR1012-CpG的构建及其体内免疫活性的研究
• 摘要
• 1. 引言
• 2. 材料和方法
• 3. 结果
• 3.1 载体的酶切
• 3.2 重组子鉴定
• 3.3 小鼠血清IgG、IgM、IgA含量测定
• 3.4 小鼠血清特异性抗体含量测定
• 3.5 血清细胞因子含量测定
• 3.6 免疫小鼠外周血免疫细胞数量的动态变化
• 3.7 攻毒小鼠器官病变的检测
• 4. 讨论
• 第三部分 壳聚糖纳米颗粒包裹CpG对实验猪免疫应答调节作用的研究
• 摘要
• 1. 引言
• 2. 材料和方法
• 3. 结果
• 3.1 免疫猪特异性抗体
• 3.2 血清IgG、IgM、IgA含量测定
• 3.3 免疫猪外周血免疫细胞数量的动态变化
• 3.4 细胞因子含量变化
• 4. 讨论
• 总结
• 参考文献
• 文献综述
• CpG寡聚多核苷酸研究进展
• 1. 概述
• 2. 研究历史
• 3. CpG DNA免疫学活性的结构基础和作用机制
• 3.1 结构基础
• 3.2 作用机制
• 4. CpG作为免疫佐剂与传统佐剂比较
• 5. CpG的应用
• 6. 展望
• 参考文献
• 在读期间发表或被接受的论文
• 致谢
• 声明