论文摘要
目的:糖尿病在我国有较高的发病率,糖尿病肾病是构成终末期肾衰竭的主要危险因素。蛋白尿是糖尿病肾病的主要临床表现,也是糖尿病肾病进展的独立危险因素。蛋白尿的发生主要与肾小球滤过屏障有关。滤过屏障由内皮细胞窗孔,基底膜及足细胞之间的裂孔隔膜组成。在糖尿病肾病进展过程中足细胞足突融合,足细胞数目减少。最近的研究显示足细胞actin网架结构改变是足突融合、消失和蛋白尿发生的先决条件。Actinin（辅肌动蛋白）是一类actin的结合和交联蛋白,可以将松散的肌动蛋白actin交联成具有收缩力的纤维束,对于锚定纤维束至胞浆膜具有辅助作用。α- actinin-4是actinin家族的新成员之一,有研究发现编码α-actinin-4的基因ACTN4突变可导致局灶节段性肾小球硬化的发生,足细胞α-actinin-4表达的改变与足突融合,蛋白尿的产生密切相关。ZO-1是一种连接蛋白,在上皮细胞间的紧密连接处表达。在肾小球,ZO-1起到将足细胞间的裂孔隔膜连接到足细胞的细胞骨架上的作用。ZO-1在上皮细胞间的紧密连接处的正确定位及表达对于细胞间通透性的维持具有重要作用。足细胞是位于肾小球滤过膜最外层的细胞。在Pima Indian 2型糖尿病病人身上发现在糖尿病肾病发展过程中,足细胞数目明显减少,足细胞数目减少的程度与蛋白尿的程度呈正相关,而且与进展至终末期肾衰竭（ESRD）的快慢相平行。在实验性糖尿病动物的研究发现,足细胞的减少可被RAS阻断剂ACEI类药物所改善。本实验应用糖尿病大鼠模型,观察糖尿病大鼠肾组织中α-actinin-4,ZO-1蛋白及mRNA的表达变化以及在糖尿病肾病发生、发展过程中足细胞数目的变化,探讨α-actinin-4, ZO-1分子在糖尿病肾病蛋白尿形成中的可能作用,血管紧张素转化酶抑制剂贝那普利对糖尿病大鼠肾组织足细胞数目、α-actinin-4、ZO-1蛋白和mRNA表达变化的影响,及其肾保护作用的机制。方法:采用健康雄性SD大鼠54只,体重170-220g,随机抽取18只作为正常对照组,其余36只大鼠给予2%链脲菌素（STZ）60mg/Kg一次性腹腔注射。72小时血糖≥16.7mmol/L确定为糖尿病大鼠模型,而后随机分为糖尿病组和贝那普利干预组各18只。贝那普利干预组给予贝那普利10mg/Kg.d灌胃,每日一次,正常对照组与糖尿病组仅给予等量自来水灌胃,每日一次。实验期间大鼠自由饮水、标准饮食,不使用胰岛素及其他降糖药物。实验开始后第8周、12周各组任取6只大鼠测定血糖、血肌酐、尿肌酐、肾重/体重,计算肌酐清除率、尿白蛋白排泄率。处死大鼠,留取左肾皮质,分别做组织学、超微结构,免疫组织化学方法检测肾小球α-actinin-4、ZO-1蛋白表达及WT-1标记的足细胞数目,应用RT-PCR观察α-actinin-4、ZO-1mRNA在肾组织中的表达。结果:在8周、12周,糖尿病组血糖、肌酐清除率、肾重/体重、尿白蛋白排泄率较正常对照组均有不同程度的升高（P<0.01）而贝那普利干预组肌酐清除率、肾重/体重、尿白蛋白排泄率显著低于同时期糖尿病组（P<0.05）。肾小球光镜病理切片PAS染色糖尿病组嗜PAS物质较同时期正常组明显增多,电镜观察糖尿病组在8周时出现基底膜不规则增厚,系膜区增宽,上皮细胞足突融合,12周时上述变化更加显著,贝那普利干预组较同时期糖尿病组变化明显减轻。糖尿病组大鼠肾组织α-actinin-4蛋白及mRNA表达在两个时间点较正常组均明显增加（P<0.01）,贝那普利干预组在8周时其表达较糖尿病组显著下降（P<0.05）,而在12周时其表达较糖尿病组仍下降,却无统计学意义。糖尿病组大鼠肾组织ZO-1蛋白及mRNA表达在两个时间点较正常组均明显减少（P<0.05）,贝那普利干预组在8周时其表达较糖尿病组显著增加（P<0.05）,而在12周时其表达较糖尿病组仍增加,却无统计学意义。糖尿病组大鼠足细胞数目在两个时间点均明显减少（P<0.05）,贝那普利干预组大鼠足细胞数目较糖尿病组明显增加（P<0.05）。α-actinin-4与足细胞数目呈负相关关系r= -0.957 P=0.0027,ZO-1的表达与足细胞数目呈正相关r=0.923 p=0.0086,而足细胞数目与尿蛋白量呈负相关r=0.923 p=0.0086。结论:1、糖尿病大鼠肾皮质α-actinin-4蛋白及mRNA表达上调,ZO-1编码蛋白及其mRNA表达下降,肾小球足细胞数目减少。2、α-actinin-4的表达与足细胞数目呈负相关关系,ZO-1的表达与足细胞数目呈正相关关系,而足细胞数目与尿蛋白量呈负相关关系。3、血管紧张素转化酶抑制剂贝那普利能抑制α- actinin-4的过度表达,并上调ZO-1蛋白及其mRNA表达。4、贝那普利可降低糖尿病大鼠24小时尿蛋白定量,减轻肾脏组织学改变,对糖尿病大鼠肾病的发生,发展具有一定的保护作用。
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