论文摘要
目的:细胞周期素（cyclins）是一种细胞周期调控子,其表达水平随细胞周期各时相的转换而改变。不同的cyclins在不同时期通过与相应的周期素依赖性激酶（CDK）结合和分离,导致其底物磷酸化及去磷酸化,对细胞周期的各阶段进行调控。cyclin H与其他cyclins所不同的是,cyclin H的表达在整个细胞周期过程中不呈周期性变化。cyclin H是一种新的细胞周期素,可以增强CDK7的磷酸化功能并激活其他CDKs。因此,人们推测,CDK7/cyclin H复合物极有可能是细胞周期CDK/cyclins级联反应进程中的上游元件。目前的研究资料显示:cyclin H、CDK7在肿瘤组织中的表达水平明显高于非肿瘤组织,其过度表达可催化CDK分子的异常活化,导致细胞过度增殖。故此,可将它作为一种新的增殖指标对指导临床化疗及判断肿瘤转归及预后有重要意义。现阶段国内外学者大多涉及实体瘤（如胃癌、结肠癌、乳腺癌、恶性黑色素瘤等）的研究,关于在白血病中的研究资料很少,国内尚未见报道。本研究旨在检测CDK7/cyclin H mRNA在白血病中表达并分析其临床意义。希望为探讨白血病的发病机制、判断疗效及指导治疗有帮助。方法:研究对象为101例急性白血病（AL）患者（其中包括69例初治患者、13例复发患者和19例持续完全缓解期患者）,15名健康人做正常对照。应用半定量RT-PCR方法检测骨髓单个核细胞cyclin H、CDK7 mRNA表达水平及P53、cyclin E2、CDK2 mRNA表达水平。结果: 1在白血病细胞株HL60、K562中cyclin H mRNA均呈阳性表达。在AL患者中,69例初治组患者阳性率为66.7%（46/69）,表达水平为（0.9100±0.6559）;13例复发组患者阳性率为76.9%（10/13）,表达水平为（0.9600±0.5045）;19例缓解组患者阳性率为36.8%（7/19）,表达水平为（0.5505±0.2663）;而用同一实验条件在15名正常人中仅有3例呈阳性表达,阳性率为20%,表达水平为（0.3420±0.2352）。初治组和复发组阳性率和表达水平明显高于缓解组和正常对照组（P<0.05）;其中初治组和复发组阳性率和表达水平比较没有统计学意义（P>0.05）,缓解组和对照组比较没有统计学意义（P>0.05）。对69例初治AL患者进行疗效评估,45例获得CR,CR率为65.2%。其中cyclin H mRNA阳性表达的AL患者其CR率（56.5%）明显低于cyclin H阴性表达者的CR率（82.6%）,（χ2=4.600,P<0.05）,有统计学意义。对缓解的45例患者追踪随访,其中39例可进行临床评估,持续缓解31例,复发8例。在8例复发患者中6例cyclin H mRNA为阳性表达,阳性表达组的复发率（6/42,14.3%）高于阴性表达组的复发率（2/21,9.5%）,卡方分析（χ2=0.286,P>0.05）,差别没有统计学意义,这可能与观察时间较短,复发例数少有关系,尚需进一步随访观察。2在白血病细胞株HL60、K562中CDK7 mRNA均呈阳性表达。在AL患者中,初治组患者阳性率为65.2%（45/69）,表达水平为（1.0612±0.5786）;13例复发组患者阳性率为84.6%（11/13）,表达水平为（1.1908±0.6863）;19例缓解组患者阳性率为36.8%（7/19）,表达水平为（0.7532±0.1738）;而用同一实验条件在15名正常人中仅有3例呈阳性表达,阳性率为20%,表达水平为（0.6453±0.2523）。初治组和复发组阳性率和表达水平明显高于缓解组和正常对照组（P<0.05）;其中初治组和复发组阳性率和表达水平比较没有统计学意义（P>0.05）,缓解组和对照组比较没有统计学意义（P>0.05）。对69例初治白血病患者进行疗效评估,其中45获得CR,CR率为65.2%。其中CDK7 mRNA阳性表达的AL患者其CR率（55.6%）明显低于CDK7阴性表达者的CR率（83.3%）,（χ2=5.324,P<0.05）,有统计学意义。对缓解的45例患者追踪随访,其中39例可进行临床评估,持续缓解31例,复发8例。在8例复发患者中6例CDK7 mRNA为阳性表达,阳性表达组的复发率为（6/41,14.6%）高于阴性表达组的复发率（2/22,9.1%）,卡方分析（χ2=0.397,P>0.05）,差别没有统计学意义,这可能与观察时间较短,复发例数少有关系,尚需进一步随访观察。3在所同时检测69例AL患者中,用pearson相关分析发现cyclin H mRNA与CDK7 mRNA之间有相关性（r=0.388,P=0.009）。我们同时检测了35例cyclin H、CDK7 mRNA同时阳性表达的AL缓解率为51.4%,同时阴性表达缓解率为92.3%。两者同时阳性表达组缓解率明显低于同时阴性表达组缓解率,且差别有统计学意义（χ2=6.759,P<0.05）,也低于单一阳性表达组。4 cyclin H、CDK7 mRNA的表达与AL患者临床一般资料之间的关系。在性别、年龄、白细胞计数之间阳性率和表达水平无显著性差异（P>0.05）;M2、M3、M4、M5、L2各亚型间cyclin H mRNA表达水平有差别,M3中表达水平最高,但各亚型间差别无统计学意义（P值均大于0.05）。CDK7 mRNA在L2中表达水平最高,但各亚型间差别无统计学意义（P值均大于0.05）。5 cyclin H、CDK7与其他细胞周期调控因子之间的关系。在AL患者中,CDK7/cyclin H与CDK2/cyclin E2无相关关系（P>0.05）,可能主要是在活性方面的调节;cyclin H、CDK7与P53在mRNA水平上仅有负相关趋势而无明显的相关关系（r=-0.122, r=-0.175, P>0.05）。P53是CAK酶的作用底物,可能主要是活性方面的调节。结论: 1 cyclin H、CDK7在AL患者初治组和复发组中的阳性率和mRNA表达水平明显高于持续缓解组和正常对照组。阳性表达的AL患者缓解率低,易复发,治疗效果差。提示cyclin H、CDK7参与AL的发生与发展,阳性表达是AL预后不良指标。2在AL患者中,cyclin H与CDK7有正相关关系。两者同时阳性表达的患者缓解率低于单一阳性表达患者,均比阴性表达患者缓解率低。提示两者在白血病发病机制中可能作为复合体起协同作用。3在AL患者中,CDK7/cyclin H与CDK2/cyclin E2无相关关系。推测,CDK7/cyclin H可能在磷酸化CDK2/cyclin E2中起主要作用,而不是提高它的基因和蛋白水平,CDK7/cyclin H的升高使CDK2/cyclin E2的活性增加了,驱使细胞超越G1 / S期限制点而导致细胞周期缩短、细胞增殖增加,从而在白血病的发生中起重要作用。4在AL患者中,cyclin H、CDK7与P53在mRNA水平上仅有负相关趋势而无明显的相关关系。P53是CAK酶的作用底物,在P53激活的条件下,CAK活性的下降仅仅由于功能性P53的存在,而与P53数量的关系不是很明确。