论文摘要
目的:观察IL-24对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。方法:将IL-24真核表达载体pcDNA3.1(-)-IL-24和空载体pcDNA3.1(-)分别用电转染法转染SKOV3细胞,经G418筛选获取IL-24的稳定转染克隆,以野生型SKOV3细胞作为阴性对照,用RT-PCR检测IL-24mRNA在三组细胞中的表达情况,hoechst33258荧光染色法观察凋亡细胞形态,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率。结果:1.3组SKOV3细胞在含G418 600μg/ml的完全性培养液培养一周后,显微镜下观察阴性对照组细胞全部死亡,IL-24转染组及空载体转染组形成少量的SKOV3细胞克隆;将G418浓度改为300μg/ml继续培养两周后,IL-24组及空载体组可见大量岛状的细胞团块生长,获得大量的SKOV3细胞阳性克隆。2.RT-PCR产物电泳显示,IL-24转染组可分别在600+bp和500+bp处扩增出IL-24mRNA和GADPH特异性条带;阴性对照组和空载体转染组SKOV3细胞,未见IL-24mRNA的特异性条带。3.Hoechst33258染色显示:稳定转染IL-24的SKOV3细胞在荧光显微镜下可观察到不同程度的凋亡细胞,表现为:细胞核固缩,呈致密强蓝色荧光;DNA浓缩边聚向核膜靠拢形成半月形;部分细胞核碎裂成块状形成凋亡小体。而阴性对照组和转染空载体的SKOV3细胞染色后显示细胞核形态规则,呈淡蓝色荧光,极少见到凋亡小体和凋亡细胞。4.流式细胞仪检测未转染、转染空载体及稳定转染IL-24后的各组SKOV3细胞早期平均凋亡率分别为3.33%,3.60%,14.51%。三组SKOV3细胞早期凋亡细胞率的差异具有统计学意义(F=1205.073,P<0.05),组间两两比较发现,阴性对照组、空载体转染组与mda-7转染组SKOV3细胞之间,早期凋亡细胞率有显著性差异(p<0.05);而阴性对照组与空载体转染组之间,早期凋亡细胞率无显著性差异(p=0.318)。结论:IL-24能诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡。
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