中药虎杖雌激素活性成分及其物质基础研究

论文摘要

中药活性组分的确定是中医药现代化系统工程中一个十分重要的内容。传统的中药活性成分研究方法由于其自身的局限性,无法实现样品的快速制备和高效筛选,同时还会忽略一些有活性的微量成分,而这些微量成分对于新药开发往往具有非常诱人的前景。本论文以中药虎杖为研究对象,采用制备效率高、重复性好的高效液相色谱制备手段和具有高通量特性的转基因酵母雌激素活性测试方法相结合,即活性跟踪分离法来研究虎杖中的雌激素活性成分。在转基因酵母法跟踪雌激素活性的基础上,对虎杖乙酸乙酯分配组分进行了薄层色谱及柱色谱分离,对具有高雌激素活性的硅胶柱制备产物进行了工业级高效液相色谱精制,并应用HPLC-MS联用技术对精制组分中的活性成分进行了结构鉴定,发现虎杖中存在一种目前尚未报道的雌激素活性物质—6-羟基芦荟大黄素。采用HPLC-APCI串联质谱技术研究了1,8-二羟基蒽醌类化合物的质谱裂解规律,并用于虎杖中2种蒽醌类衍生物的结构解析,同时根据有机分子的质谱断裂规律,推测了中药虎杖乙醚组分中三种萘醌类化合物。利用五次简单的线性梯度快速获取了虎杖乙醚组分中44个峰的保留值方程,并考察了各成分之间的c-a关系。同时利用色谱峰自动曲线拟合方法获取了各色谱峰的峰型参数,用分离峰的峰型参数获取了峰型规律并且用于对谱图的仿真。在此基础上,应用移动重叠分辨分离图和谱图仿真技术,发展了计算机辅助的虎杖乙醚组分的液相色谱全局优化以及目标优化方法,为虎杖液相色谱活指纹谱的应用研究奠定了理论和方法基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 引言
• 1.2 植物雌激素的研究概况
• 1.2.1 雌激素与雌激素替代疗法
• 1.2.2 植物雌激素的生物活性
• 1.2.2.1 雌激素样/抗雌激素样作用
• 1.2.2.2 抗肿瘤作用
• 1.2.2.3 抗骨质疏松作用
• 1.2.2.4 预防心血管疾病
• 1.2.2.5 改善更年期综合症
• 1.2.3 植物雌激素的作用机理
• 1.2.3.1 与ER 有关
• 1.2.3.2 与雌激素产生的主要酶类有相互作用
• 1.2.4 植物雌激素的分类及来源
• 1.2.5 植物雌激素活性测试方法
• 1.2.5.1 体内实验
• 1.2.5.2 体外实验
• 1.2.6 植物雌激素分析方法介绍
• 1.3 中药与植物雌激素
• 1.4 中药虎杖的研究概况
• 1.4.1 虎杖的化学成分
• 1.4.2 虎杖的药理作用
• 1.4.2.1 对心血管系统的作用
• 1.4.2.2 抗病原微生物作用
• 1.4.2.3 保肝作用
• 1.4.2.4 抗氧化作用
• 1.4.2.5 抗肿瘤作用
• 1.4.2.6 雌激素样作用
• 1.4.2.7 其他药理作用
• 1.5 本课题的提出
• 参考文献
• 第二章 虎杖雌激素活性组分的制备与筛选研究
• 2.1 引言
• 2.2 材料和方法
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 主要仪器
• 2.2.3 方法
• 2.2.3.1 HPLC 测定虎杖提取物组成
• 2.2.3.2 虎杖样品的制备
• 2.2.3.3 转基因酵母法测定样品的雌激素活性
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 转基因酵母测定雌二醇（E2）标准曲线
• 2.3.2 转基因酵母测定虎杖标准品的雌激素活性
• 2.3.3 虎杖标准品的HPLC 分析
• 2.3.4 虎杖总提取物及其各部位的成分组成和雌激素活性
• 2.3.5 虎杖薄层制备产物的雌激素活性及其成分组成
• 2.3.6 虎杖乙酸乙酯分配组分硅胶柱分离产物的雌激素活性及成分组成
• 2.3.7 组分的高效液相色谱制备
• 2.3.7.1 组分Hz001-02 的高效液相制备及其雌激素活性表征
• 2.3.7.2 组分Hz001-03 的高效液相制备及产物的雌激素活性
• 2.3.8 Hz001-02-05 和Hz001-02-06 中活性成分的定性分析
• 2.4 小结
• 参考文献
• 第三章 虎杖化学成分的液相色谱-质谱鉴定
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 仪器与试剂
• 3.2.2 实验条件
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 质谱条件的优化
• 3.3.2 虎杖乙醚组分的总离子流图
• 3.3.3 虎杖乙醚组分蒽醌类化合物的鉴定
• 3.3.3.1 标准品大黄素和大黄素甲醚的LC-MS 和LC-MS-MS 分析
• 3.3.3.2 虎杖中1,8-二羟基蒽醌类衍生物的鉴定
• 3.3.4 虎杖乙醚组分二苯乙烯类化合物的鉴定
• 3.3.5 虎杖乙醚组分萘醌类化合物的鉴定
• 3.4 小结
• 参考文献
• 第四章 中药虎杖液相色谱分析方法研究
• 4.1 引言
• 4.2 方法与技术
• 4.2.1 液相色谱保留值方程
• 4.2.2 系统延迟和柱内延迟
• 4.2.3 保留时间预测的方法
• 4.2.4 a、c 参数获取的方法
• 4.2.5 内标校正
• 4.2.6 色谱峰EMG 模型
• 4.2.7 自动拟合方法获取峰型参数及其变化规律
• 4.2.8 移动重叠分辨分离图
• 4.2.9 任意梯度条件的保留时间预测
• 4.2.10 人工干预谱图仿真
• 4.2.11 目标优化
• 4.2.12 复杂样品分析软件系统-CSASS（Complex Sample Analysis Software System）
• 4.2.13 二元流动相系统中抑制剂的添加
• 4.3 实验部分
• 4.3.1 仪器与试剂
• 4.3.2 样品的制备
• 4.3.3 色谱条件
• 4.3.4 数据处理
• 4.4 结果与讨论
• 4.4.1 五次线性梯度获取a、c 参数
• 4.4.2 a、c 关系的考察
• 4.4.3 虎杖乙醚组分峰型参数及规律
• 4.4.4 任意梯度条件下的谱图仿真
• 4.4.5 虎杖乙醚组分的全局优化
• 4.4.6 虎杖未知组分仿真目标优化
• 4.5 小结
• 参考文献
• 作者简介及发表文章
• 致谢