论文摘要
研究目的:本课题探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对血管平滑肌细胞增殖的影响,为阐明神经因素与平滑肌细胞增生调控之间的关系提供理论依据。研究方法:取五个月胎龄水囊引产人胚胎的主动脉,体外原代培养血管平滑肌细胞,用α-SM-actin 免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。实验分为A:联胺诱导组;B:联胺+CGRP 组;C:CGRP 组;D:正常对照组。CGRP 和联胺的作用浓度分别为2×10-7mol/L 和5×10-6mol/L。用细胞计数法、MTT 法检测细胞增殖,RT-PCR 法检测细胞周期蛋白D1、E 和基质金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）mRNA 的表达,流式细胞仪法检测细胞周期的变化。研究结果:本文用胎儿腹主动脉原代培养的细胞呈典型“峰与谷”样生长。培养的血管平滑肌细胞通过α-SM-actin 免疫细胞化学染色鉴定,98%以上的细胞呈阳性反应。从细胞生长曲线可以看出第3-5 天是细胞的对数生长期。联胺作为巯基氧化剂,能诱导血管平滑肌细胞脂质过氧化刺激平滑肌细胞的增殖。CGRP 作用正常血管平滑肌细胞,24 小时之后对细胞的增殖呈抑制作用,但对联胺诱导增生的血管平滑肌细胞抑制作用更明显。CGRP 对周期蛋白D1 mRNA 的表达有明显下调作用,对TIMP-2 mRNA 的表达有上调作用。提示:CGRP 对血管平滑肌细胞的增殖和迁移有调控作用。结论:1、人胚胎血管平滑肌细胞原代培养通过α-SM-actin 免疫细胞化学染色鉴定,纯度可达98%以上。细胞生长的第3-5 天是细胞生长的对数期。2、联胺作为巯基氧化剂可作为血管平滑肌细胞增殖的诱导剂。3、CGRP 对血管平滑肌细胞的增殖有下调作用,特别对联胺诱导增生的平滑肌细胞作用更明显,提示CGRP 对平滑肌细胞增殖有调控作用,有必要对其作用机理作进一步研究。4、CGRP 对TIMP-2 mRNA的表达有上调作用,提示对平滑肌细胞的迁移有调控作用。 1111
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