论文摘要
目的:建立谷氨酸诱导PC12细胞凋亡的模型,探讨6-姜酚肟对谷氨酸诱导PC12细胞凋亡的影响;建立NGF诱导PC12细胞分化的模型,探讨6-姜酚肟对NGF诱导PC12细胞分化的影响。方法:体外培养PC12细胞,倒置显微镜下观察活细胞形态。用谷氨酸造成细胞损伤,MTT法检测细胞活力,流式细胞术和Hoechst 33258 DNA染色法检测细胞凋亡,比较各种浓度的6-姜酚肟对PC12细胞凋亡的影响;用NGF诱导PC12细胞分化,倒置显微镜观察6-姜酚肟和NGF对PC12细胞分化和突起生长的影响并拍照;采用免疫荧光技术检测各组PC12细胞中突触素的反应的阳性强度。结果:（1）经2.50～20.0 mmol/L谷氨酸处理24 h后,PC12细胞的活力比对照组明显降低,细胞存活率随谷氨酸浓度的升高而降低。谷氨酸对PC12细胞活力的半数影响浓度(IC50)约为5.00 mmol/L。（2）在一定浓度范围内,6-姜酚肟能保护PC12细胞免受谷氨酸的影响,但是在较高浓度时6-姜酚肟对细胞有一定的毒性。经不同浓度的6-姜酚肟（3.13,6.25,12.50,25.00μg/mL）预处理后,PC12细胞活力明显提高,其保护作用随其浓度降低而提高。当浓度为6.25μg/mL时效果最好,细胞存活率达到75.20%（P＜0.01）,当浓度为3.13μg/mL时对细胞的保护能力有所下降,细胞存活率为70.24%（P＜0.01）。（3）谷氨酸能诱导PC12细胞凋亡,5.00 mmol/L的谷氨酸处理24 h后细胞凋亡率为20.10%。经6-姜酚肟（3.13,6.25,12.50,25.00μg/mL）预处理后,细胞凋亡率明显降低,分别为3.50%（P＜0.01）,2.80%（P＜0.01）,9.60%（P＜0.01）,17.7%（P＜0.05）。（4）NGF能诱导PC12细胞分化,10μg/L与50μg/L的NGF作用PC12细胞48 h后,分化细胞的百分比和阳性突起数目与对照组相比均明显增加（P＜0.01）,50μg/L的NGF作用效果强于10μg/L的NGF。6-姜酚肟和10μg/LNGF共同孵育PC12细胞48h后,细胞的分化情况与50μg/L的6-姜酚肟单独作用相似。（5）6-姜酚肟单独作用于PC12细胞时,免疫荧光突触素染色阴性。6-姜酚肟和10μg/L NGF共同作用时的荧光强度与50μg/L NGF单独作用时的荧光强度相似,两者无明显差别（P＞0.05）。结论:（1）谷氨酸能诱导PC12细胞凋亡,较低浓度的6-姜酚肟能有效对抗Glu诱导的PC12细胞凋亡而保护细胞,其中6.25μg/mL的6-姜酚肟效果最好。（2）NGF能诱导PC12细胞向神经元样细胞分化。6-姜酚肟单独作用不能引起PC12细胞分化,但它能使低浓度NGF诱导PC12细胞分化的能力增强,使之达到高浓度NGF的效果。
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