论文摘要
目的：探讨风湿性心脏病钙化心脏瓣膜中是否存在纳米细菌以及钙化心脏瓣膜中纳米细菌的分离、培养及鉴定。方法：实验分为6组：病变瓣膜组，正常瓣膜组，γ射线消毒血清阴性对照组，纳米细菌菌株Se90阳性对照组，粉状羟基磷灰石组及DMEM空白对照组。取钙化及正常心脏瓣膜匀浆，0.22um滤器过滤，高速离心后取沉淀与其余各组同条件培养。动态光学显微镜下观察及动态检测各培养组的吸光度值。收获后的培养液行纳米细菌单克隆抗体和hoechst 33258免疫荧光双染色及透射电镜鉴定。结果：光学显微镜下观察可见病变瓣膜组、Se90阳性对照组及羟基磷灰石组有细小的运动迅速的黑色颗粒。各培养组的动态吸光度值及不同时间点的吸光度值有差别(p=0.000，p=0.000)。纳米细菌单克隆抗体和hoechst 33258免疫荧光双染色显示病变瓣膜组的全部样本及正常瓣膜组的两个样本在FITC激发光下可见如Se90阳性对照组样的绿色荧光颗粒。透射电镜显示病变瓣膜组在用醋酸铀染色和不用醋酸铀染色的情况下均可见如Se90阳性对照组样的88～341nm大小、形态规则、有一定内部结构的颗粒。结论：采用合适的方法可以在风湿性心脏病钙化的心脏瓣膜中分离培养出纳米样颗粒。纳米样颗粒经光镜观察、纳米细菌单克隆抗体和hoechst 33258免疫荧光双染色及透射电镜可以初步鉴定为纳米细菌。