论文摘要
早老性痴呆即阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）,是一种中枢神经系统退行性疾病,表现为全面的认知障碍,包括:记忆、定位、判断和推理。其临床特点是隐袭起病,逐渐出现记忆力减退、认知功能障碍、行为异常和社交障碍。通常病情呈进行性加重,逐渐丧失独立生活能力,严重影响了患者的生活质量,也给患者家庭和社会带来了沉重的负担。随着人口的老龄化,AD的发病率逐渐上升,痴呆病人越来越多,由此给家庭和社会造成的负担也越来越重,因此,继续投入人力和物力,进行相关的基础和应用研究是各国政府和研究机构的重要任务。虽然和发达国家相比,我国的现代医学基础比较薄弱,但我们有自己的优势,我们有一个完整的中医药理论系统,经过几千年的临床验证,保存下来了大量的值得进一步深入研究和探讨的有效治疗方法,如何发挥我们的优势,科学地研究并应用这些宝贵资源是我们现在的首要任务。中医临床治疗老年痴呆主要采用活血化瘀、延年益寿的治疗原则,本研究基于这种理论基础,并结合以往的药理学研究,选用组成简单（丹参、三七、冰片）疗效确切的经典活血化瘀复方,即复方丹参作为研究对象,从整体、组织和细胞水平,采用行为学、生化和免疫组织化学等多种方法对复方丹参的作用以及其可能的作用机制进行了初步的研究,以期对该药物在早老性痴呆病的应用方面提供可靠的研究资料。1复方丹参对拟痴呆模型小鼠脑功能衰退的改善作用及初步机制分析衰老是诱发AD的危险因素,大量自由基引发的脂质过氧化反应,与细胞和整个机体的衰老密切相关。本研究采用腹腔注射D-半乳糖（D-gal）和亚硝酸钠（NaNO2）致拟痴呆小鼠的模型,观测复方丹参对模型动物学习记忆能力以及生化和病理学指标的影响。1.1复方丹参对拟痴呆模型小鼠学习记忆的影响采用腹腔注射D-gal和NaNO2致拟痴呆小鼠模型,应用水迷宫检测复方丹参对拟痴呆动物学习记忆能力的影响。结果显示,腹腔合并注射D-gal和NaNO2 53 d后,小鼠的学习记忆能力明显下降,在水迷宫实验中,其进入盲端的次数明显增多和找到平台的时间均明显延长,给予复方丹参A工艺、B工艺大、中、小剂量、和C工艺均能不同程度的改善动物的学习记忆功能,体现为小鼠在B、C点入水后的训练和测试时间明显缩短,错误次数减少,提示复方丹参对早老性痴呆有一定的治疗前景。另外,从数值上看A工艺和B工艺小剂量组的作用与其他给药组相比略差。1.2复方丹参对拟痴呆模型小鼠神经元损伤的影响采用腹腔注射D-gal和NaNO2致拟痴呆小鼠模型,应用甲苯胺兰尼氏体染色,观察大鼠海马和皮层神经细胞的损伤情况。结果显示,造模63d后观察,小鼠海马和皮层的神经细胞损伤,复方丹参治疗可以明显改善模型小鼠海马和皮层中神经细胞的病理形态。1.3复方丹参对拟痴呆模型小鼠脑组织生化代谢的影响采用腹腔注射D-gal和NaNO2致拟痴呆小鼠模型,应用生物化学法检测脑组织生化代谢,观察复方丹参对模型动物脑组织自由基损伤的影响。结果显示,连续腹腔注射D-gal和NaNO260d,可以造成小鼠脑组织自由基损伤,表现为脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力明显下降,丙二醛（MDA）含量显著增加。复方丹参A工艺、B工艺大、中、小剂量和C工艺连续给药60d均不同程度的减轻了自由基损伤,表现为脑组织中SOD和GSH-Px活力增强,MDA含量降低,与模型组相比差异显著。1.4复方丹参对拟痴呆模型小鼠海马及皮层胆碱相关酶的影响采用腹腔注射D-gal和NaNO2致拟痴呆小鼠模型,应用免疫组织化学染色分析法检测大脑组织中乙酰胆碱酯酶和胆碱乙酰转移酶的活力。结果显示,腹腔注射D-gal和NaNO2 60 d后,大脑胆碱能神经系统中的乙酰胆碱酯酶（AchE）活力上升,胆碱乙酰转移酶（ChAT）活力下降。给予复方丹参对AchE的活力没有显著的影响,但复方丹参B工艺大剂量、中剂量和C工艺可显著提高模型动物海马中ChAT的活力,复方丹参B工艺大剂量、中剂量可显著提高模型动物皮层中ChAT的活力。2复方丹参对早老性痴呆大鼠的作用及初步机制分析AD的发生后其主要的病理改变均与Aβ的毒性密切相关。本研究采用经典的早老性痴呆动物模型,将经过老化处理的聚集态Aβ1-40注射到大鼠海马,促使动物产生痴呆样症状,治疗给药,观测复方丹参对模型动物学习记忆能力以及生化和病理学指标的影响。2.1复方丹参对早老性痴呆大鼠学习记忆的影响采用海马注射Aβ1-40致早老性痴呆的大鼠模型,应用Morris水迷宫检测复方丹参对早老性痴呆大鼠学习记忆的影响。结果显示,模型动物找到平台的时间和游泳路程均明显延长,复方丹参A工艺、复方丹参C工艺、复方丹参B工艺大剂量、中剂量均可显著改善Aβ1-40引起的记忆功能损伤,表现为找到平台的时间和游泳路程均明显缩短;以上各药物组之间无显著差异。复方丹参B工艺小剂量没有明显作用。2.2复方丹参对早老性痴呆大鼠神经细胞损伤的影响采用于海马注射Aβ1-40致早老性痴呆的大鼠模型,应用甲苯胺兰尼氏体染色的方法,观察大鼠海马和皮层神经细胞的损伤情况。结果显示,假手术组海马结构完整,低倍镜下海马CA1、CA2、CA3和齿状回均清晰可辨。高倍镜下可见CA1区细胞排列整齐,胞浆尼氏体着色清晰,胞核淡染,核仁清楚。模型组CA1区锥体神经细胞胞体明显变形,排列稀疏不整齐,细胞带不完整,神经元数目减少,细胞浆尼氏体着色降低。各给药组海马CA1区神经元胞浆染色清晰,胞核淡染,形态明显好于模型组;给药组之间无明显差异。2.3复方丹参对早老性痴呆大鼠海马及皮层胆碱相关酶的影响采用海马注射Aβ1-40致早老性痴呆的大鼠模型,应用生化测定的方法,观察海马以及皮层乙酰胆碱相关酶的变化。结果显示,模型动物海马和皮层ChAT活力明显降低,阳性药哈伯因组大鼠海马和皮层ChAT活力明显升高。复方丹参B工艺大剂量、中剂量、C工艺可明显增加海马ChAT的活力;复方丹参B工艺大剂量和中剂量可明显增加皮层ChAT的活力;但复方丹参A工艺对模型大鼠海马和皮层ChAT活力无显著影响。复方丹参各组对脑组织中AChE的活力均无明显影响。2.4复方丹参对早老性痴呆大鼠神经斑块形成的影响采用海马注射Aβ1-40致早老性痴呆的大鼠模型,应用Thioflavin荧光染色的方法,观察海马神经斑块的形成。结果显示,模型动物海马神经斑块增加,复方丹参B工艺大剂量可明显抑制神经斑块的形成,其他各给药组作用不明显。2.5复方丹参对早老性痴呆大鼠β-分泌酶的影响采用海马注射Aβ1-40致早老性痴呆的大鼠模型,应用免疫组织化学法,观测海马中β-分泌酶（β-secretase,BACE）的活力变化。结果显示,模型动物β-分泌酶的活力有增加趋势;复方丹参B工艺中剂量、复方丹参C工艺轻度降低β-分泌酶含量,但是与模型组相比无统计学意义。综上所述,复方丹参能够明显改善实验性早老性痴呆动物行为以及病理改变,表现出一定的抗早老性痴呆作用,包括可以明显增强拟痴呆模型动物的学习记忆能力;改善模型动物脑内神经细胞的损伤;改善拟痴呆模型动物脑组织中SOD和GSH-Px活力,抑制MDA含量的增加;增强海马和皮层中ChAT的活力。以上结果提示,复方丹参对早老性痴呆的预防和治疗有一定的应用前景,值得进一步深入研究和开发。