论文题目: 新型重组α-型干扰素的克隆、表达及活性的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 药理学
作者: 陈宜鸿
导师: 程桂芳,刘屏
关键词: 新型重组型干扰素,克隆,表达,抗病毒活性,细胞,干复津
文献来源: 中国协和医科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本研究课题利用生物工程技术合成了新型重组α型IFN-α(122Arg)，并对其生物活性进行了检测。 新型重组α型IFN基因的克隆：根据全长DNA序列，设计大致相等的8个片段，正、反向链各4个。其中F1-F4为正向链；R1-R4为反向链，与设计序列相应片段互补。利用美国ABI公司生产的自动DNA合成仪进行合成。将PCR扩增产物与pUC18进行双酶切后构建克隆载体，并转化至大肠杆菌，经蓝白斑筛选，提取质粒，测定插入的DNA序列表明，与设计目标一致。 新型重组α型IFN基因在大肠杆菌中的表达：构建表达载体质粒，将含全合成的人新型重组α干扰素基因片段的pUC18重组质粒用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切，与pBV220连接后，转化至大肠杆菌，42℃热诱导表达目的蛋白。结果显示，表达蛋白主要以包涵体的形式存在。通过超声破菌，抽提复性后以Sephacryl S-200HR分离获得目标蛋白。 新型重组α型IFN的生物活性检测：为研究其抗乙型肝炎病毒的作用，本试验在转染有乙型肝炎病毒基因的人肝癌细胞系2.2.15细胞中，研究了其对2.2.15细胞的毒性、HBsAg和HBeAg的分泌以及细胞培养液中HBV-DNA水平的影响。阳性对照药为美国安进公司生产的干复津。结果表明：新型重组α型IFN的半数中毒浓度(TC50)＞10μg／ml。最大无毒浓度（＞10μg／ml）与2.2.15细胞培养8天，对HBeAg和HBsAg的分泌具有一定的抑制作用。以斑点杂交法检测表明对细胞培养液的HBV-DNA水平有显著抑制作用。斑点杂交结果显示，干复津对细胞培养上清中的HBV-DNA水平也有抑制作用。新型重组α型IFN的抗病毒作用稍优于干复津。
论文目录:
缩写词
中文摘要
英文摘要
综述
前言
第一部分 新型重组α型干扰素基因的克隆
材料与方法
结果与讨论
第二部分 新型重组α型干扰素在大肠杆菌中的表达
材料与方法
结果与讨论
第三部分 新型重组α型干扰素的活性检测
材料与方法
结果与讨论
第四部分 新型重组α型干扰素的急性毒性
结论
参考文献
致谢
在学习期间完成的论文、论著等情况
个人简历
发布时间: 2006-10-13
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