枸橼酸杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性及耐药基因研究

论文摘要

目的了解川东北地区临床分离枸橼酸杆菌的耐药情况,为临床合理用药提供参考依据。筛选产ESBLs菌株并进行基因分型,了解其分子流行病学特征;进一步研究CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的分子结构特征。方法1.用琼脂二倍稀释法检测β-内酰胺类药物对24株枸橼酸杆菌临床分离株的MIC,纸片法筛选产ESBLs菌株;提取β-内酰胺酶进行酶活性测定。2.设计针对最常见的三种类型超广谱β-内酰胺酶blaTEM、blaSHV和blaCTX-M基因的三对引物,对筛选出的12株产超广谱β-内酰胺酶菌株进行耐药基因的PCR扩增检测。3.采用重叠延伸PCR定点诱变技术,对CTX-M型超广谱β-内酰胺酶Ser240（丝氨酸）AGC进行定点突变,分析突变前后酶活性的变化。结果1.15种抗菌药物的MIC检测结果发现,24株枸橼酸杆菌对AMP、CEF两种抗菌药物的耐药率最高（100%）,对其他药物的耐药率由高到低依次是FAM、CFP、CFZ、PIP、CTX、FEP、SAM、CAZ、CAZ/SB、CRO、TZP、FD（87.5%—4.17%）,对IMI完全敏感。24株耐药菌中筛选到产ESBLs菌株12株。2.PCR扩增检测发现:8株耐药菌株为产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶菌株;3株耐药菌为产TEM型超广谱β-内酰胺酶菌株;2株耐药菌为产SHV型超广谱β-内酰胺酶菌株。1株菌株同时产生TEM和CTX-M两种酶。余12株菌株未检测出上述三种酶。3.对CTX-M酶Ser240进行了定点突变,观察到当Ser240突变为Gly240后,CTX-M酶的活性完全丧失。结论1.亚胺培南是治疗本地区产ESBLs枸橼酸杆菌所致感染有效的药物。2.本地区产ESBLs枸橼酸杆菌中CTX-M族酶检出率最高,其次是TEM族酶,检出率最低的是SHV族酶。3.Ser240对于维持CTX-M酶的活性非常重要。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 枸橼酸杆菌临床分离株的耐药性及表型鉴定
• 1. 实验材料
• 2. 实验方法
• 3. 实验结果
• 讨论
• 第二部分 产超广谱β-内酰胺酶枸橼酸杆菌的基因检测
• 1. 实验材料
• 2. 实验方法
• 3. 实验结果
• 讨论
• 第三部分 CTX-M 型超广谱β-内酰胺酶基因定点突变对酶活性的影响
• 1. 实验材料
• 2. 实验方法
• 3. 实验结果
• 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 文献综述：柠檬酸杆菌属的耐药机制研究进展
• 致谢
• 攻读硕士期间发表的论文