论文摘要
生物活性肽是指具有生物活性的多肽,在细胞生理及代谢功能的调节上具有重要的作用,其研究已经成为多肽类药物以及功能性食品的开发热点。酶法水解蛋白质获得活性肽是当前制备活性肽的主要手段。由于单一酶存在水解位点单一、水解不彻底等缺点,采用复合酶解已成为研究的一个重要方向。本文选用了木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶以及酸性蛋白酶进行单一酶解,测定了最佳酶解条件下酶解物促脾淋巴细胞增殖的活性和对DPPH·自由基的清除能力,其中木瓜蛋白酶酶解液具有最高的免疫活性。采用双酶复合酶解,得到木瓜蛋白酶与中性蛋白酶复合酶解,酶解液具有最高的促进淋巴细胞增殖的能力,复合酶解条件为:[E/S]为9000 U/g,中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的水解温度各为50℃和45℃,pH各为7.1和6.8,分别水解2 h和1.5 h。两酶复合酶解物的淋巴细胞增殖率比单酶酶解物增加了20.8%。免疫活性与DPPH·清除能力之间存在显著的相关性（r=0.96,P<0.01）。采用DA201-C大孔吸附树脂对复合酶水解液进行初步分离,氨基酸组成分析表明随着乙醇浓度的升高,疏水性氨基酸含量逐渐增大,75%乙醇洗脱组分具有最高的免疫活性。进一步采用SephadexG-15以及RP-HPLC分离,并确定了较优的分离条件。最后对具有最高的清除自由基能力的组分进行了体外的免疫学实验以及氨基酸序列测定,实验证明从鹿茸血蛋白酶解液中分离、纯化得到的小肽具有增强机体免疫活性的作用;液质联用分析得到三个主要的组分Leu-Tyr（LY）或者Ile-Tyr（IY）,Try-Gln（WQ）,Leu（或Ile） -Ala-Phe-Ala（LAFA或IAFA）,或者Leu（或Ile）-Ala-Ala-Phe（LAAF或IAAF）,表明免疫活性肽的氨基酸组成具有末端为疏水性氨基酸的特点。
论文目录
摘要Abstract第一章 绪论1.1 免疫活性肽的研究现状与趋势1.1.1 动物蛋白来源的免疫活性肽1.1.2 免疫活性肽的生理功能1.1.3 免疫活性肽的作用特点1.2 免疫活性肽的制备方法1.2.1 化学方法制备免疫活性肽1.2.2 分离提取天然免疫活性肽1.2.3 蛋白质分解获得免疫活性肽1.3 免疫活性肽的免疫功能测定1.4 立题依据及意义1.5 研究内容第二章 酶解鹿茸血蛋白制备免疫活性肽以及酶解液脱色2.1 引言2.2 实验材料2.2.1 主要试剂2.2.2 实验仪器与设备2.3 实验方法2.3.1 单一酶水解方法2.3.2 双酶复合酶解方法2.3.3 水解度测定2.3.4 蛋白含量的测定2.3.5 色素含量的测定2.3.6 蛋白质含量的测定2.3.7 酶解产物清除DPPH 自由基活性的测定2.3.8 脾淋巴细胞增殖活性的测定2.3.9 水解液相对分子质量分布的测定2.3.10 数据分析2.4 实验结果与分析2.4.1 单一酶酶解物活性测定结果2.4.2 不同酶复合的酶解物活性比较2.4.3 复合酶解条件的确定2.4.4 酶解液浓度对小鼠脾T 淋巴细胞增殖活性的影响2.4.5 酶解液相对分子质量的分布测定结果2.4.6 活性炭脱色条件的优化2.5 讨论2.6 本章小结第三章 复合酶解物中免疫活性肽的分离纯化3.1 引言3.2 材料与设备3.2.1 实验材料3.2.2 主要仪器设备3.3 实验方法3.3.1 大孔吸附树脂对免疫活性肽的初步分离3.3.2 氨基酸组成3.3.3 SephadexG-15 分离纯化免疫活性肽3.3.4 半制备RP-HPLC 分离纯化免疫活性肽3.3.5 分离组分清除DPPH·自由基活性测定3.4 实验结果与分析3.4.1 DA201-C 大孔吸附树脂分离结果3.4.2 SephadexG-15 分离纯化免疫活性肽3.4.3 半制备RP-HPLC 分离纯化免疫活性肽3.5 讨论3.6 本章小结第四章 免疫活性肽的活性测定以及氨基酸序列分析4.1 引言4.2 实验材料与设备4.2.1 实验材料4.2.2 主要仪器4.3 实验方法4.3.1 脾淋巴细胞增殖率测定4.3.2 大肠杆菌的荧光标记4.3.3 小鼠腹腔巨噬细胞的收集4.3.4 腹腔巨噬细胞吞噬作用的测定4.3.5 白细胞介素IL-1 的测定4.3.6 液质连用分析免疫活性肽4.3.7 数据分析4.4 实验结果与分析4.4.1 脾淋巴细胞增殖率活性4.4.2 腹腔巨噬细胞吞噬作用4.4.3 白细胞介素IL-14.4.4 液质联用分析氨基酸序列论文主要结论致谢参考文献附录：攻读硕士学位期间发表的论文
相关论文文献
标签：鹿茸血论文; 酶解论文; 免疫活性肽论文; 分离纯化论文;
