抗肝癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定

论文题目: 抗肝癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定

论文类型: 博士论文

论文专业: 内科学

作者: 周旻

导师: 杨冬华

关键词: 肝癌,癌噬菌体单链抗体,筛选,鉴定,集落挖掘法,免疫组化

文献来源: 暨南大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目前,获取抗肝癌单链抗体(single chain variable fragment antibody, scFv)的方法有两种:一是将抗肝癌单克隆抗体改造成scFv,由于这种抗肝癌scFv的抗原结合位点与亲本单抗相同,它与肝癌抗原结合的特异性受到亲本单抗的限制,因此,不是真正意义上的新抗体。二是构建抗肝癌噬菌scFv库,该库是采用人肝癌细胞系免疫小鼠而构建的,它包含了抗肝癌细胞抗原的全套scFv,因此,对抗体库进行筛选不仅可以发现新型抗肝癌scFv,而且也是获取新抗体的重要途径。近年来,将抗肝癌单克隆抗体改造成抗肝癌scFv已获成功,并发现其具有体外抗肝癌作用、并能与免疫毒素形成融合蛋白。目前,对抗肝癌单链抗体的研究仍停留在建库阶段,2001年杨冬华等构建了2.14×10~6抗肝癌scFv库,2004年又将库容量扩增成5.3×10~7;2002年李赏等构建了2×10~5抗肝癌scFv库;2004年粘红等构建1.1×10~6库容的肝癌scFv库;常规的筛选和鉴定方法为:采用“吸附-洗脱-扩增”对库菌进行多轮富集、从最后1轮富集菌中随机挑取库菌逐个鉴定,如用肝癌细胞系和正常胎肝细胞系(如李赏等)、或肝癌细胞系和其它肿瘤细胞系(粘红等)对库菌产生的抗肝癌scFv的特异性进行鉴定。迄今,尚未见此方面深入研究报道。目前,抗肝癌噬菌体scFv库的筛选和鉴定方法仍有不足之处,随机挑取法工作量大、筛选库菌的规模小、带有盲目性,用肝癌细胞系与正常肝细胞系来鉴定虽可排除与正常肝细胞结合的抗肝癌scFv,但不能排除与非肝癌细胞结合的抗肝癌scFv;用肝癌细胞系和非肝癌细胞系来鉴定虽可排除与非肝癌结合的抗

论文目录:

中文摘要

英文摘要

第一部分集落挖掘法和随机挑取法初筛抗肝癌噬菌体单链抗体库

前言

材料与方法

结果

讨论

第二部分抗肝癌噬菌体单链抗体特异性鉴定及基因序列测

前言

材料与方法

结果

讨论

第三部分鉴定抗人肝癌细胞系单链抗体对人肝癌组织的特异性

前言

材料与方法

结果

讨论

全文总结

参考文献

综述

缩写词

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致谢

发布时间: 2005-10-27

参考文献

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抗肝癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定

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