TNF-α基因多态性与脓毒症的相关性研究

论文摘要

脓毒症（sepsis）是严重创（烧）伤、休克、感染、外科大手术后常见的并发症,是由于感染而导致的全身性炎症反应综合征（systemic inflammation responsesyndrome, SIRS）的临床表现。如果脓毒症早期持续的SIRS得不到有效的控制,进一步发展可导致脓毒性休克、多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome, MODS）,而MODS的进一步发展为多脏器功能衰竭（multiple organ failure, MOF）, MOF是临床危重患者的最主要死亡原因之一。脓毒症是严重威胁人类健康的一个综合征,人们在长期实践过程中逐渐加深了对脓毒症的认识,力图提高临床疗效,降低发病率和死亡率。但是脓毒症的发病机制十分复杂,是多基因参与的遗传因素和环境因素共同作用的结果。在脓毒症的发生发展过程中伴随着大量的炎症介质即细胞因子的释放和参与。细胞因子在脓毒症的发生发展和预后方面发挥着重要作用。研究表明脓毒症整个病理生理过程就是伴随炎症因子的发生和消长的过程。而这种过程受到多种因素的影响,正是这种细胞因子的消长反映并影响了脓毒症的转归和预后。其中,肿瘤坏死因子扮演着重要的角色。肿瘤坏死因子的表达与启动子区的多态性高度相关,不同个体表达水平可能决定其疾病转归。为积累本地区病例,建立个体化治疗,本文从基因和表达蛋白两个角度观察脓毒症的进展关系,为下一步研究提供进一步研究平台。研究目的：1.探讨本地区在严重脓毒症患者、SIRS患者和健康对照人群中TNF-a的表达情况；2.为了进一步深入了解这种变化的内在机制,探讨基因表达和TNF-α关系,从而科学评价敏感个体,提供个体化治疗,我们从基因多态性方面入手,了解TNF-α基因多态性与脓毒症的易感性关系,从而为脓毒症发病机制及易感性方面为临床治疗提供理论依据。研究方法：1.选取天津医科大学第二医院ICU病房2009年10月至2010年9月符合入选标准且资料完整的严重脓毒症32例和SIRS病人48例为病例组,选择同期天津医科大学第二医院健康查体者50人为健康对照组,分别取血测定相应指标；2.采用酶联免疫吸附法（ELISA）测病例组和对照组人群血清的TNF-a水平；3.采用聚合酶链反应技术（polymerase chain reaction, PCR）扩增SNP所在片段,再行限制性片段长度多态性分析（restriction fragmenilengthpotymorphism,即RFLP）,观察病例组和对照组中TNF-a基因在-308位点和-238位点的基因型。研究结果：通过ELISA方法检测出80例病例组和50例健康对照组血清TNF-a的浓度水平：病例组血清TNF-a的浓度为77.418±10.019pg/ml,健康对照组血清TNF-a的浓度为15.955±4±3.728pg/ml,前者浓度比后者高（P<0.05）,具有统计学差异；在80例病例组中,严重脓毒症组血清TNF-α的浓度为84.255±8.106pg/ml,SIRS组血清TNF-a浓度为72.859±8.506 pg/ml,前者浓度比后者高（P<0.05）,具有统计学差异。在基因多态性研究方面,对于TNF-a-238位点,AA、GA、GG基因型在严重脓毒症组中的频率分别为3.125%、18.750%、78.125%,在SIRS组中分别为0.000%、14.583%、85.417%,在健康对照组中分别为0.000%、12.000%、88.000%。经χ2检验后,3组基因型分布差异无统计学意义（χ2=3.901,P=0.42>0.05）。3组的A、G等位基因频率比较差异无统计学意义（χ2=2.347,P=0.309>0.05）；对于TNF-a-308位点,从、AG、GG基因型在病例组中的频率分别为6.250%、18.750%、75.000%,在SIRS组中分别为2.084%、14.583%、83.333%,在健康对照组中分别为0.000%、14.000%、86.000%。经χ2检验后,3组基因型分布差异无统计学意义（χ2=3.934,P=0.415>0.05）。3组的A、G等位基因频率比较差异无统计学意义（χ2=3.292,P=0.193＞0.05）。说明本实验人群在TNF-a-238位点和TNF-a-308位点,均存在基因多态性,但其基因型分布和等位基因频率无差别。结论：1.发现本地区在严重脓毒症病人、SIRS患者和正常对照人群中TNF-a水平存在统计学差异（P<0.05）；血清TNF-a浓度在一定程度上与患者感染的程度相关；2.对TNF-a多态性研究结果显示本实验研究人群TNF-a的238位点和-308位点均存在G,A两种等位基因,GG,GA,AA三种单核昔酸多态基因型。本地区TNF-a-308位点的基因多态性与感染严重程度可能无明显相关性；本试验还首次证明了本地区汉族人群TNF-a-238位点的基因多态性与感染严重程度可能无明显相关性。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 一、血清TNF-α水平的研究
• 1.1 对象和方法
• 1.1.1 入选标准
• 1.1.2 研究对象
• 1.1.3 研究方法
• 1.1.3.1 主要仪器及试剂组成
• 1.1.3.2 实验方法及步骤
• 1.1.4 统计学处理
• 1.2 结果
• 1.2.1 绘制标准曲线
• 1.2.2 各分组TNF-α浓度的比较
• 1.3 讨论
• 1.3.1 病例组与健康对照组血清TNF-α浓度的比较
• 1.3.2 严重脓毒症组与SIRS组血清TNF-α浓度的比较
• 1.4 小结
• 二、TNF-α基因多态性和脓毒症的关系
• 2.1 对象和方法
• 2.1.1 入选标准
• 2.1.2 研究对象
• 2.1.3 研究方法
• 2.1.3.1 主要仪器及试剂组成
• 2.1.3.2 实验方法
• 2.1.4 统计学方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 PCR扩增产物电泳图
• 2.2.2 PCR扩增产物酶切后电泳图
• 2.2.3 TNF-α-238G/A和-308G/A在研究对象中的分布
• 2.2.3.1 TNF-α-238G/A在研究对象中的分布
• 2.2.3.2 TNF-α-308G/A在研究对象中的分布
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述
• 综述参考文献
• 致谢