导读:本文包含了青霉扩展菌碱性脂肪酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:毕赤酵母,扩展青霉,碱性脂肪酶,优化
青霉扩展菌碱性脂肪酶论文文献综述
孙肖明,吴涵,卜秀娟,韩颖,张浩东[1]（2012）在《重组毕赤酵母发酵生产扩展青霉碱性脂肪酶的优化》一文中研究指出通过毕赤酵母工程菌表达碱性脂肪酶,对表达条件进行了优化。先进行单因素实验,筛选出对碱性脂肪酶表达影响较大的4个因素:诱导时间、初始pH、甲醇添加量和接种量;在单因素实验的基础上设计四元线性回归实验,利用SPSS18数据处理软件进行数据优化,结果表明,诱导时间为96h、初始pH为6.0、甲醇添加量为0.5%、接种量为150mL时有最佳的表达效果,碱性脂肪酶活力为242.7U/mL。(本文来源于《食品科技》期刊2012年11期）
施碧红,陈明,翟妙仙,严蕾,陈文静[2]（2011）在《基于易错PCR定向进化扩展青霉Penicillium expansum FS1884碱性脂肪酶》一文中研究指出为改善扩展青霉FS1884碱性脂肪酶的活性及酶学性质,利用连续两轮易错PCR对扩展青霉FS1884脂肪酶基因PEL进行随机突变,在大肠杆菌JM109中构建突变文库。含突变脂肪酶基因的重组质粒电击转化巴斯德毕赤酵母GS115,经过YPOM板初筛和橄榄油检验板复筛,获得一株酶活性提高的脂肪酶突变体:PEL-ep25-GS。与野生型脂肪酶PEL-GS相比,在最适温度40℃、pH9.4时突变体的酶活力是野生型酶的1.3倍。测序结果表明:该突变体第253位氨基酸发生了突变,由赖氨酸变成蛋氨酸。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2011年11期）
卜秀娟,孟宪梅,柳增善,代平[3]（2010）在《扩展青霉碱性脂肪酶结构基因的克隆与原核表达》一文中研究指出目的克隆并原核表达扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)结构基因。方法提取扩展青霉总RNA,经RT-PCR扩增PEL结构基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a-PEL,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式及表达量,包涵体蛋白经变性、复性后,采用NaOH滴定法测定其酶活性。结果经RT-PCR扩增获得约780bp的PEL结构基因;所构建的重组表达质粒pET-28a-PEL经酶切及PCR鉴定正确;目的蛋白的相对分子质量约为28000,以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的10%;发酵液及复性的包涵体蛋白酶活性可达12.44U/ml。结论已成功克隆并原核表达了PEL结构基因,为获得碱性脂肪酶高产基因工程菌株奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2010年05期）
蔡容华,施碧红,施巧琴,吴松刚[4]（2008）在《扩展青霉FS1884碱性脂肪酶基因5′端侧翼区域的转录调控序列的初步研究》一文中研究指出脂肪酶(Lipase,EC3.1.1.3)是催化油酯水解的一类酶的总称,在许多动植物组织和微生物中普遍存在,且广泛应用于洗涤剂、医药、食品、化妆品和皮革等领域,是最早被研究的一类重要工业用酶。目前,国内唯一市场化的国产碱性脂肪酶产品是来自真菌扩展青霉的碱性脂肪酶,该生产菌是我院从土壤分离,经二十多代诱变育种获得发酵酶活单位达8000U/ml的碱性脂肪酶高产菌株FS1884。但该菌株对诱变剂已产生"疲劳效应"。为此,本研究以扩展青霉FS1884为出发菌株,扩增得到其脂肪酶基因5'端侧翼序列,并分析上游调控序列,寻找调控脂肪酶合成的转录因子,进行理性的、定向改造扩展青霉脂肪酶基因的启动子序列,为利用基因工程手段大幅度提高产酶水平及其脂肪酶合成的分子机理奠定基础。主要研究内容如下:(1)通过衔接头PCR方法,从扩展青霉FS1884基因组DNA中扩增得到约5000bp的碱性脂肪酶基因5'端侧翼区域的单一产物,进行序列测定及提交GenBank数据库,并经启动子软件与序列比对分析。(2)对该碱性脂肪酶基因5'端侧翼区域进行片段缺失扩增,得到系列亚克隆片段,连接到以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的pGlow-TOPO质粒中,构建了系列重组表达质粒,并成功转化大肠杆菌E.coli TOP10。荧光显微观察其发光情况,并通过荧光分光光度计检测其荧光强度。(3)进一步将脂肪酶基因5'端侧翼区域的系列亚克隆片段定向连接到启动子探针型载体pSUPV4中,构建能在大肠杆菌E.coli JM109中启动卡那抗性基因表达的重组质粒。根据抗性的强度不同,说明了不同的启动子片段对卡那抗性基因的启动表达能力不同。这些结果与启动GFP报告基因表达相比较,进一步确认启动子的功能。(本文来源于《华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编》期刊2008-08-01）
李强,施碧红,施巧琴,吴松刚[5]（2008）在《扩展青霉FS1884碱性脂肪酶的分子改造》一文中研究指出碱性脂肪酶生产菌株FS1884是以扩展青霉(Penicillium expansum)S14为出发菌株,经UV、NTG、Co~(60)、He-Ne激光等18代诱变育种获得的,经优化培养基组成后,酶活力比原始菌株提高了140倍以上,已经用于工业生产。但是该菌株对各种诱变剂产生了一定程度的疲劳效应,通过进一步的物理化学诱变方法较难达到筛选出高产突变株的目的,本研究着重进行扩展青霉碱性脂肪酶的分子改造。提取该菌株总RNA,以Oligo dT为引物合成cDNA第一链,用分别含有BamHⅠ和EcoRⅠ限制性酶切位点的一对引物扩增碱性脂肪酶全长cDNA,经双酶切后连接到表达载体pPIC3.5K中,转化大肠杆菌JM109,挑取阳性克隆子,测序验证,正确后大量抽提质粒DNA,用SalⅠ线性化,转化毕赤酵母GS115,经MD、OMM平板初步验证,成功表达。以含有扩展青霉全长cDNA的质粒为模板,应用一步突变法对其cDNA进行定点诱变,成功完成Thr50->Cys、Thr93/Thr94->Tyr/Tyr、Leu164->pro、Met220->Val的突变,经毕赤酵母GS115分泌表达,甲醇诱导后,初步检测酶活发现,性质有一定改善。在定点诱变的基础上进一步对该脂肪酶基因进行随机突变,采用易错PCR技术扩增脂肪酶基因,调节Mg~(2+)浓度到7mmol/L,Mn~(2+)浓度为100μmol/L,并使用低保真的聚合酶,适当增加扩增中的突变频率,建立高通量筛选模型,对酶的耐热性、比活力、稳定性进行筛选,以获得性状较优的突变体。(本文来源于《华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编》期刊2008-08-01）
卞传兵,袁彩,陈荔清,林琳,黄明东[6]（2008）在《扩展青霉碱性脂肪酶的高分辨率晶体结构》一文中研究指出脂肪酶(EC 3.1.1.3)是催化水解长链酰基甘油的一类羧基酯酶,具界面激活现象。除了具有在油一水界面上催化叁酰甘油水解、转酯和分离消旋混合物的能力外,而且可以在非水相中合成脂肪。许多脂肪酶常表现出磷脂酶、溶血磷脂酶、胆固醇酯酶、角质酶、酰胺酶等酶学性质,食品加工、黄油增香、酯交换、洗涤、酿造及制备药剂、化学试剂、香料等行业得到广泛应用。扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)是由扩展青霉PF898(Penicillium expansum PF898)产生的叁酰甘油脂肪酶,经过晶体生长、数据收集得到最高分辨率为1.3 A的X一射线衍射数据。但由于其与已知脂肪酶具有比较低的同源性(最高21%),利用常规分子取代法无法进行结构解析。通过在通过在室内Cu靶,Cr靶以及(本文来源于《中国晶体学会第四届全国会员代表大会暨学术会议学术论文摘要集》期刊2008-07-27）
陈丹,卢士英,柳增善[7]（2008）在《扩展青霉碱性脂肪酶的克隆、表达及表达产物的活性分析》一文中研究指出以扩展青霉为出发菌株,用Biospin RNA Simply P试剂盒提取其总RNA,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出扩展青霉碱性脂肪酶结构基因.构建真核重组表达质粒pEL-pIC9,电转化His4缺陷型巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,利用MD-MM平板及PCR方法筛选和鉴定出重组子,进行甲醇诱导表达.重组子发酵液经SDS-PAGE分析显示获得了分子量约28 ku的1条特异条带,用橄榄油检验板法和NaOH滴定法测其活性,酶活可达225 U/mL.结果表明,扩展青霉碱性脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中能高效表达为有脂肪酶活性的高活力酶.(本文来源于《河北师范大学学报(自然科学版)》期刊2008年02期）
林峻,施碧红,施巧琴,何云霞,王明兹[8]（2007）在《基因组改组技术快速提高扩展青霉碱性脂肪酶产量》一文中研究指出本研究应用基因组改组技术快速提高扩展青霉碱性脂肪酶的产量。采用经过多代诱变的碱性脂肪酶产生菌扩展青霉(Penicillium expansum)FS8486以及分离自新疆火焰山口土样的溜曲霉(Aspergillus Tamarii)FS-132作为出发菌株,通过PEG进行两轮原生质体融合,再通过琼脂块法进行初筛,摇管法进行一次复筛,常规摇瓶法进行二次复筛,从而得到基因组改组后的数株优良子代。其中一株酶活较出发菌株FS8486提高317%。对亲本与子代菌株的形态型、RAPD(随机扩增多态性(本文来源于《第六届中国酶工程学术研讨会论文摘要集》期刊2007-10-21）
林峻,施碧红,施巧琴,何云霞,王明兹[9]（2007）在《基因组改组技术快速提高扩展青霉碱性脂肪酶产量》一文中研究指出应用基因组改组技术快速提高扩展青霉碱性脂肪酶的产量。采用经过多代诱变的碱性脂肪酶产生菌扩展青霉(Penicillium expansum)FS8486以及分离自新疆火焰山口土样的溜曲霉(Aspergillus tamarii)FS-132作为出发菌株,经过两轮基因组改组,得到数株优良子代。其中一株酶活较出发菌株FS8486提高317%。对亲本与子代菌株的形态型、RAPD(随机扩增多态性DNA)多态性和脂肪酸组成分析初步确定筛选获得的菌株为亲本的改组子代。首次将基因组改组技术成功应用于真核微生物基因组改造,短期内使目标代谢产物获得提高,这对于在真核微生物育种中进一步推广该技术具有重要意义。(本文来源于《生物工程学报》期刊2007年04期）
陈丹[10]（2007）在《扩展青霉碱性脂肪酶的高效表达与活性研究》一文中研究指出本实验以扩展青霉为出发菌株,用试剂盒提取其总RNA,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出780 bp左右的片段,核苷酸序列分析表明其与碱性脂肪酶结构基因(PEL)一致。将此基因克隆到原核表达载体pET-DsbA、pkk223-3中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,没有得到有活性的表达蛋白。将此基因克隆到真核表达载体pPIC9中,电转化His4缺陷型巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,通过MD-MM平板及PCR方法筛选和鉴定重组子。重组子发酵液经SDS-PAGE分析和橄榄油检验板初步鉴定,表明扩展青霉碱性脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中得到了高效表达。表达蛋白分泌至培养基中,分子量约28 ku,与预期大小一致。橄榄油平板检测说明该蛋白能分解橄榄油,优化发酵条件后,用NaOH滴定法测其活性,酶活可达225 u/mL。结果表明,PEL在真核表达系统中表达活性较高,在原核表达系统中表达没有活性。(本文来源于《吉林大学》期刊2007-04-24）
青霉扩展菌碱性脂肪酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为改善扩展青霉FS1884碱性脂肪酶的活性及酶学性质,利用连续两轮易错PCR对扩展青霉FS1884脂肪酶基因PEL进行随机突变,在大肠杆菌JM109中构建突变文库。含突变脂肪酶基因的重组质粒电击转化巴斯德毕赤酵母GS115,经过YPOM板初筛和橄榄油检验板复筛,获得一株酶活性提高的脂肪酶突变体:PEL-ep25-GS。与野生型脂肪酶PEL-GS相比,在最适温度40℃、pH9.4时突变体的酶活力是野生型酶的1.3倍。测序结果表明:该突变体第253位氨基酸发生了突变,由赖氨酸变成蛋氨酸。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
青霉扩展菌碱性脂肪酶论文参考文献
[1].孙肖明,吴涵,卜秀娟,韩颖,张浩东.重组毕赤酵母发酵生产扩展青霉碱性脂肪酶的优化[J].食品科技.2012
[2].施碧红,陈明,翟妙仙,严蕾,陈文静.基于易错PCR定向进化扩展青霉PenicilliumexpansumFS1884碱性脂肪酶[J].中国生物工程杂志.2011
[3].卜秀娟,孟宪梅,柳增善,代平.扩展青霉碱性脂肪酶结构基因的克隆与原核表达[J].中国生物制品学杂志.2010
[4].蔡容华,施碧红,施巧琴,吴松刚.扩展青霉FS1884碱性脂肪酶基因5′端侧翼区域的转录调控序列的初步研究[C].华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编.2008
[5].李强,施碧红,施巧琴,吴松刚.扩展青霉FS1884碱性脂肪酶的分子改造[C].华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编.2008
[6].卞传兵,袁彩,陈荔清,林琳,黄明东.扩展青霉碱性脂肪酶的高分辨率晶体结构[C].中国晶体学会第四届全国会员代表大会暨学术会议学术论文摘要集.2008
[7].陈丹,卢士英,柳增善.扩展青霉碱性脂肪酶的克隆、表达及表达产物的活性分析[J].河北师范大学学报(自然科学版).2008
[8].林峻,施碧红,施巧琴,何云霞,王明兹.基因组改组技术快速提高扩展青霉碱性脂肪酶产量[C].第六届中国酶工程学术研讨会论文摘要集.2007
[9].林峻,施碧红,施巧琴,何云霞,王明兹.基因组改组技术快速提高扩展青霉碱性脂肪酶产量[J].生物工程学报.2007
[10].陈丹.扩展青霉碱性脂肪酶的高效表达与活性研究[D].吉林大学.2007