副猪嗜血杆菌动物模型的建立及其在模型动物体内的移行分布

论文摘要

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HPS)是猪Glasser’s病的病原体,引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎。随着养猪业的发展,该病近年在世界范围流行逐渐呈上升趋势,给养猪业造成巨大经济损失。我国在1995年发现本病,经病原学和流行病学研究表明,现已遍及大多数省、市,成为影响我国养猪业发展的重要细菌病之一。本试验通过用HPS血清5型标准菌株(Strain Nagasaki)接种液体培养基,在37℃,200r/min条件下培养,取不同时间点和浓度的液体培养物,接种实验动物,探索HPS的液体培养物感染动物的最佳时间。并进行了Strain Nagasaki对部分常用的不同品种品系的SPF小鼠、大白鼠、金黄地鼠、豚鼠以及清洁级豚鼠和兔子的致病性试验,筛选出易感的实验动物。通过对易感动物的感染试验,观察临床病理变化,进行与本动物的临床病理变化比较,以及病原在实验动物体内的纯分离鉴定,初步建立了HPS感染动物模型。以1.30×109CFU(0.2ml)气管感染模型动物,感染后6h、8h、10h、12h、13h、14h和16h不同的时间段,取模型动物的主要组织器官大脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏,通过免疫组化结合病原的分离,检测HPS在模型动物体内的移行分布。实验结果表明,在培养10～13h,菌数达109CFU/ml及以上,是HPS感染动物的最佳时间段;经过对几种实验动物的感染比较,发现豚鼠对HPS最为敏感;通过对豚鼠的临床病理变化与猪临床病理变化的比较,结果表明豚鼠与猪Glasser’s病有相似的病理变化,初步确定豚鼠为HPS理想的感染模型动物;免疫组化检测结果显示:在感染后6h,首先肺脏呈现弱阳性;感染后8h时,肺脏和肾脏呈现出阳性;感染后10h时,肝脏和脾脏呈现阳性;感染后12h时,心脏呈现阳性;感染后14h时;大脑呈现阳性。本试验为副猪嗜血杆菌病的发病机理、诊断及免疫研究提供了理论基础。

论文目录

• 摘要
• Summary
• 第一部分 文献综述
• 第一章 副猪嗜血杆菌的研究进展
• 1.1 病原学研究进展
• 1.1.1 培养及生化特性
• 1.1.2 菌体形态学
• 1.1.3 血清型
• 1.2 分子生物学研究
• 1.2.1 分子流行病学
• 1.2.2 功能基因研究
• 1.3 致病机理与毒力因子
• 1.3.1 致病机理
• 1.3.2 毒力因子
• 第二章 副猪嗜血杆菌感染动物模型的研究进展
• 2.1 本动物感染试验
• 2.1.1 感染SPF 猪
• 2.1.2 初乳缺乏（CD）和母猪喂养（SR）仔猪
• 2.1.3 剖腹产不喂初乳（CDCD）和自然分娩后不喂初乳（ NFCD） 仔猪
• 2.2 实验动物感染试验
• 2.3 总结与展望
• 第二部分 研究报告
• 第三章 副猪嗜血杆菌培养基的筛选
• 引言
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 培养基和试剂
• 3.1.2 试验菌株
• 3.1.3 实验动物
• 3.1.4 培养基制备
• 3.1.5 固体培养基的筛选
• 3.1.6 液体培养基的筛选
• 3.1.7 感染实验动物
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 菌落大小观察
• 3.2.2 液体培养物平板计数
• 3.2.3 感染豚鼠试验
• 3.3 讨论
• 第四章 副猪嗜血杆菌对部分常用实验动物的致病性试验
• 引言
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 培养基
• 4.1.2 HPS 菌株
• 4.1.3 实验动物
• 4.1.4 感染实验动物
• 4.1.5 临床和剖检观察
• 4.1.6 细菌学检查
• 4.1.7 HPS 对易感动物半数致死量（LD50）的测定
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 SPF 实验动物的感染
• 4.2.2 清洁级实验动物的感染试验
• 4.2.3 临床症状和剖检变化
• 4.2.4 病原菌的分离与鉴定
• 50 的测定结果'>4.2.5 LD₅₀的测定结果
• 4.3 讨论
• 第五章 副猪嗜血杆菌感染动物模型的初步建立
• 引言
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 实验仪器和试剂
• 5.1.2 实验动物
• 5.1.3 HPS 菌株
• 5.1.4 不同接种途径感染试验
• 5.1.5 豚鼠感染试验
• 5.1.6 组织切片的制作
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 不同途径感染豚鼠试验结果
• 5.2.2 豚鼠感染结果
• 5.2.3 临床症状
• 5.2.4 剖检观察
• 5.2.5 组织学变化
• 5.3 讨论
• 第六章 副猪嗜血杆菌在模型动物体内的动态分布
• 引言
• 6.1 材料与法方
• 6.1.1 培养基
• 6.1.2 免疫组化试剂
• 6.1.3 菌株
• 6.1.4 实验动物
• 6.1.5 豚鼠感染试验
• 6.1.6 免疫组化染色
• 6.2 结果与分析
• 6.2.1 病原分离培养
• 6.2.2 免疫组化检测结果
• 6.3 讨论
• 第七章 结论
• 致谢
• 导师简介
• 参考文献
• 作者简介