肌醇六磷酸对人结肠癌细胞系HT-29细胞分化的影响及作用机制的探讨

论文摘要

目的:不同浓度的IP6作用于人结肠癌细胞系HT-29,观察IP6对癌细胞分化的影响,并对其机制进行探讨。方法:将不同浓度的IP6（对照组,1.8 mM,3.3 mM）作用HT-29细胞不同时间（1d,3d,5d）,分别进行如下研究:1、使用透射电镜观察IP6对HT-29细胞超微形态的影响。2、IP6作用3d后,使用流式细胞仪分析各组细胞周期。3、应用RT-PCR法检测IP6对HT-29细胞内c-Myc mRNA表达的影响。4、使用免疫细胞化学法检测IP6对HT-29细胞内Rb、c-Myc蛋白表达的影响。5、测定碱性磷酸酶比活性。结果:1、3.3mM IP6持续作用后,透射电镜下可以观察到细胞结构发生改变,出现核固缩、细胞器丰富、微绒毛增多等分化趋势。2、IP6对HT-29细胞细胞周期有明显的阻滞作用,并呈剂量依赖关系。流式细胞仪分析,G0/G1期细胞明显增多,S期、G2/M期细胞则相应减少。3、RT-PCR和免疫细胞化学实验结果显示,与对照组相比,各浓度IP6均能使细胞内c-Myc mRNA和蛋白的表达减少（P＜0.05）。4、免疫细胞化学实验结果表明,IP6能够上调Rb蛋白的表达（P＜0.05）。5、IP6作用HT-29细胞后,碱性磷酸酶比活性明显增强。结论:IP6能够促使HT-29细胞向正常细胞转化。IP6可能通过上调Rb蛋白的表达,下调c-Myc蛋白的表达,阻滞细胞周期,诱导细胞分化而发挥其抗肿瘤作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 实验材料与方法
• 1.1 主要试剂
• 1.2 人结肠癌细胞系HT-29
• 1.3 实验仪器
• 6的制备'>1.4 IP₆的制备
• 1.5 人结肠癌细胞系HT-29细胞培养方法
• 6对HT-29细胞形态的影响'>1.6 倒置显微镜观察IP₆对HT-29细胞形态的影响
• 6对HT-29细胞形态的影响'>1.7 透射电镜观察IP₆对HT-29细胞形态的影响
• 1.8 流式细胞仪分析细胞周期
• 6对HT-29细胞内c-Myc mRNA表达的影响'>1.9 RT-PCR法检测IP₆对HT-29细胞内c-Myc mRNA表达的影响
• 6对Rb、c-Myc蛋白表达的影响'>1.10 免疫细胞化学法检测IP₆对Rb、c-Myc蛋白表达的影响
• 1.11 碱性磷酸酶比活性测定
• 1.12 统计学方法
• 第二章 结果
• 6对人结肠癌系HT-29形态的影响'>2.1 倒置显微镜观察不同浓度IP₆对人结肠癌系HT-29形态的影响
• 6作用后HT-29细胞超微结构的变化'>2.2 透射电镜观察IP₆作用后HT-29细胞超微结构的变化
• 6对HT-29细胞周期分布的影响'>2.3 IP₆对HT-29细胞周期分布的影响
• 6对HT-29细胞内c-Myc mRNA表达的影响'>2.4 RT-PCR法检测IP₆对HT-29细胞内c-Myc mRNA表达的影响
• 2.5 细胞免疫组化法检测细胞内c-Myc蛋白的表达
• 2.6 细胞免疫组化法检测细胞内Rb蛋白的表达
• 2.7 碱性磷酸酶（ALP）比活性测定
• 第三章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢