微环境中趋化因子诱饵受体基因多态对乳腺癌转移潜能的影响

论文摘要

第一部分趋化因子诱饵受体基因多态与乳腺癌患者区域淋巴结转移的关联分析趋化因子诱饵受体DARC和D6通过清除血管生成性和炎性趋化因子而抑制乳腺癌的侵袭和转移。在人体内,DARC广泛表达于红细胞、血管和淋巴管的内皮细胞,D6表达于淋巴管内皮细胞。乳腺癌主要通过淋巴道和血道转移。机体微环境中DARC和D6形成了一道机体遏抑乳腺癌转移的屏障。DARC和D6编码基因的多态可能会引起相应蛋白表达或功能差异,从而影响到乳腺癌患者的转移风险。我们首先采用关联分析,选取了DARC基因和CCBP2基因（编码D6蛋白）上共十个单核苷酸多态（single nucleotide polymorphism, SNP）位点,研究其和乳腺癌患者区域淋巴结转移的关系。在785例区域淋巴结阴性和678例区域淋巴结阳性的乳腺癌患者中,我们发现DARC基因的多态rs3027012和rs12075, CCBP2基因的多态rs2228468和rs1366046与乳腺癌区域淋巴结转移相关。经过false discovery rate校正,rs12075依旧显示了统计学意义,其A型等位基因能显著减少乳腺癌区域淋巴结转移的风险,OR为0.5（95% CI为0.35-0.69,P=4.0×10-4）；rs2228468显示了具有统计学意义的趋势（P=0.052）。这提示DARC和D6编码基因的多态与乳腺癌患者区域淋巴结转移风险相关。第二部分趋化因子诱饵受体基因多态对乳腺癌转移潜能的功能学研究关联分析发现DARC基因和CCBP2基因的四个等位基因型与乳腺癌患者区域淋巴结转移相关。其中两个位于基因外显子区的多态DARC-rs12075（G42A）和CCBP2-rs2228468 （S373Y）均为错义多态。我们分别构建了pcDNA3.1-DARC-42G、pcDNA3.1-DARC-42A、pcDNA3.1-D6-373S和pcDNA3.1-D6-373Y的表达质粒,由MDA-MB-231细胞分别建立了高表达DARC的231-DARC-42G和231-DARC-42A乳腺癌细胞株、高表达D6的231-D6-373S和231-D6-373Y乳腺癌细胞株、同时高表达DARC和D6的231-DARC-42G-D6-373S和231-DARC-42A-D6-373Y乳腺癌细胞株。含不同等位基因的DARC质粒和D6质粒在乳腺癌细胞中的表达无明显差异。质粒双重稳定转染对DARC和D6在乳腺癌细胞中的表达无明显交互作用。然后通过体外、体内实验观察SNP位点对乳腺癌细胞清除趋化因子和诱导老化等生物学行为的影响。针对rs12075（G42A）,231-DARC-42A上清液中人CXCL8、CCL2和CCL5的浓度比231-DARC-42G上清液中的浓度分别降低30%-35%不等（P=0.031,P=0.028和P=0.027）。针对rs2228468（S373Y）,231-D6-373Y上清液中CCL2的浓度比231-D6-373S上清液中的浓度低了16.4%,差异具有统计学意义的趋势（P=0.069）。DARC-rs12075对诱导乳腺癌细胞老化无明显差异。体内实验发现,第5周时,231-DARC-42A所形成的移植瘤平均体积显著小于231-DARC-42G所形成的移植瘤平均体积,两者分别为1.80cm3和2.97 cm3。但是231-D6-373S和231-D6-373Y所形成的移植瘤体积无显著差异。231-DARC-42A所形成的移植瘤内的小鼠CCL2和CCL5的浓度显著低于231-DARC-42G所形成的移植瘤内的浓度（P=0.034和P=0.038）。231-D6-373Y所形成的移植瘤内的小鼠CCL2的浓度比231-D6-373S所形成的移植瘤内的浓度低11.4%,差异具有统计学意义的趋势（P=0.075）。我们在同时高表达DARC和D6的231-DARC-42A-D6-373Y细胞及移植瘤中观察到两个SNP位点对其蛋白清除趋化因子具有联合效应。此外,42GA型红细胞体外清除细胞上清液中趋化因子的能力显著高于42GG型红细胞。这部分结果提示,DARC和CCBP2基因多态通过影响其编码蛋白清除趋化因子的能力,调节乳腺癌的转移潜能。

论文目录

• 主要缩略词表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 参考文献
• 第一部分:趋化因子诱饵受体基因多态与乳腺癌患者区域淋巴结转移的关联分析
• 研究背景
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 表
• 图
• 第二部分:趋化因子诱饵受体基因多态对乳腺癌转移潜能的功能学研究
• 研究背景
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 表
• 图
• 参考文献
• 结论
• 综述
• 参考文献
• 发表和投稿的论文
• 致谢