新生儿重症监护病房多重耐药鲍曼不动杆菌耐药机制及同源性研究

论文摘要

目的：分析我院新生儿重症监护病房（neonatal intensive care unit, NICU）多重耐药鲍曼不动杆菌（multidrug-resistant Acinetobacter baumannii, MDR-AB）院内感染情况、耐药特征；检测β-内酰胺酶基因、分析细菌外膜蛋白表达以及检测生物膜形成能力；对其同源性进行研究,了解菌株分布；为临床治疗和控制NICU院内MDR-AB感染提供理论依据。方法：1.收集2006年2月至2007年6月复旦大学附属儿科医院新生儿重症监护病房分离且经纸片法药物敏感试验显示为多重耐药的26株非重复鲍曼不动杆菌。应用琼脂稀释法检测上述菌株对13种抗菌药的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）。2.PCR方法检测β-内酰胺酶基因（oxa-23、oxα-24、oxa-51、oxa-58、ampC、imp-1、imp-4、vim-2）携带情况。3.用超声波和超速离心法提取细菌的外膜蛋白（outer membrane protein, OMP）并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE）进行外膜蛋白分析。4.采用96孔板半定量法检测临床分离菌株生物膜形成能力,应用激光共聚焦显微镜观察生物膜形态。5.应用脉冲场凝胶电泳（Pulsed field gel electrophoresis, PFGE）对26株分离菌进行同源性研究。结果：1.26株非重复MDR-AB临床分离株对头孢他啶、头孢西丁、哌拉西林-他唑巴坦及环丙沙星耐药率最高（100%）,其次为头孢哌酮（96.15%）,后依次为亚胺培南（92.31%）、美罗培南（92.31%）、头孢哌酮-舒巴坦（92.31%）、磺胺甲恶唑-甲氧苄啶（92.30%）、头孢吡肟（84.61%）、左氧氟沙星（80.77%）、阿米卡星（80.76%）,对多黏菌素B均敏感。2.测试菌株中26株oxa-51均为阳性；20株（77%）oxa-23、14株（54%）ampC分别为阳性,11株（42%）oxa-23和ampC同时阳性。未检出oxa-24、oxa-58、imp-1、imp-4、vim-2基因。3.外膜蛋白检测结果显示,与ATCC 19606比较,26株多重耐药菌株在约25KDa附近外膜孔蛋白全部表达缺失或明显下调。4.96孔板半定量法检测临床分离菌株生物膜形成能力,26株鲍曼不动杆菌中有19株形成生物膜（73.1%）；与标准菌株比较,临床分离株形成能力较强。在激光共聚焦显微镜下观察生物膜形态,可见临床分离菌株形成的生物膜较标准菌株ATCC 19606形成的生物膜结构致密。5.应用脉冲场凝胶电泳（Pulsed field gel electrophoresis, PFGE）对26株分离菌进行同源性研究。体外静置培养24小时,26株细菌共分为4个克隆株,其中A克隆21株,B克隆3株,C克隆1株,D克隆1株。26株细菌中21（80.7%）株为同源菌株。结论：我院NICU分离到的MDR-AB耐药性严重,对临床常用抗菌药物的耐药率均较高,应引起临床医生的高度重视。MDR-AB耐药机制复杂,携带多种耐药基因,形成生物膜以及外孔膜蛋白缺失可能共同参与了我院NICU分离菌株的耐药机制。多重耐药菌株主要以克隆播散传播,因此在控制其引起的医院感染方面,应采取切实有效的措施,防止交叉感染。

论文目录

• 中英文缩写对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性研究
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药机制研究
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分 多重耐药鲍曼不动杆菌同源性研究
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录一:
• 综述一
• 综述二
• 附录二:发表论文
• 附录三:获奖及参加学术活动
• 致谢