论文摘要
第一部分子痫前期患者胎盘组织中Cyr61及CTGF表达研究目的检测在正常孕妇和子痫前期患者胎盘组织中Cyr61和CTGF的表达情况,探讨它们在子痫前期发病机制中的作用及两者间的关联。方法采用免疫组化SP法和实时荧光定量PCR法检测34例重度子痫前期孕妇和16例正常晚期妊娠孕妇胎盘组织中Cyr61和CTGF蛋白定位表达、mRNA水平表达。结果1.Cyr61在胎盘绒毛合体滋养细胞、细胞滋养细胞和内皮细胞中均有表达,主要表达在合体滋养细胞的胞浆内；CTGF在胎盘绒毛合体滋养细胞、细胞滋养细胞和内皮细胞中均有表达,主要表达在细胞滋养细胞的胞浆内。重度子痫前期患者胎盘中Cyr61蛋白表达水平明显低于正常组（P<0.01）。CTGF在重度子痫前期组胎盘中蛋白表达水平明显高于正常组（P<0.05）。2. Cyr61 mRNA在重度子痫前期组的表达水平较正常组明显下降,差别有统计学意义（P<0.05）;CTGF mRNA在重度子痫前期组的表达水平较正常妊娠晚期组明显增加,差别有统计学意义（P<0.01）。3.在重度子痫前期患者胎盘组织中Cyr61与CTGF表达水平呈负相关（r=-0.34,P<0.01）。结论1.子痫前期胎盘滋养细胞中Cyr61与CTGF的表达异常,导致VEGF的生成减少和ECM的重塑障碍,可能与子痫前期的发病有关。2.子痫前期胎盘滋养细胞中的Cyr61与CTGF的表达水平呈负相关,外源性加入Cyr61或VEGF可能拮抗CTGF在子痫前期发病中的作用。第二部分缺氧条件下绒毛外滋养细胞增殖及凋亡情况目的通过二氯化钴化学物质来诱导绒毛外滋养细胞缺氧过程的出现,探讨缺氧条件下滋养细胞的增殖能力及细胞凋亡情况。方法1.MTT法检测滋养细胞增殖能力：滋养细胞在二氯化钴终浓度为150μmol/L、300μmol/L的培养基中分别培养：6h、12h、24h、48h和72h。常氧组细胞在不含COCl2的培养基中培养。2.流式细胞仪检测滋养细胞的凋亡情况：滋养细胞在二氯化钴终浓度为：300μmol/L的培养基中培养6h、12h、24h、48h和72h。结果1.与正常组相比,滋养细胞在经过CoCl2处理后细胞增殖活力受到抑制；且当COCl2的浓度为300μmol/L时,对滋养细胞增殖的抑制效应较150μmol/更为明显（P<0.05）。当滋养细胞在300μmol/L COCl2作用24h时、细胞增殖能力受到显著抑制（P<0.01）。2.与正常对照组相比,滋养细胞在终浓度为300μmol/L CoCl2预下,其细胞凋亡水平随着时间的延长增加,在缺氧12h凋亡增加明显（10.7+/-0.8-fold；P<0.01）且在缺氧24h细胞凋亡水平达峰值（24.0+/-3.4-fold:P<0.05）。结论采用CoCl2模拟的化学缺氧能抑制滋养细胞的增殖并促进其细胞凋亡,随着缺氧时间的延长细胞凋亡增加且在缺氧24h细胞凋亡最显著。第三部分缺氧作用下绒毛外滋养细胞中Cyr61表达在子痫前期发病中的作用研究目的研究滋养细胞在CoCl2模拟的化学缺氧条件下,细胞基质蛋白Cyr61在滋养细胞中的表达情况；探讨Cyr61的表达与子痫前期发病机制的相关研究。方法1.采用细胞免疫荧光法检测Cyr61蛋白在滋养细胞中的定位表达。2.实时荧光定量PCR检测缺氧条件下滋养细胞中Cyr61转录水平的表达情况。3.蛋白印迹法检测缺氧条件下滋养细胞中Cyr61的蛋白水平的表达。结果1.细胞基质蛋白Cyr61主要表达在滋养细胞的胞浆中,部分表达在细胞核中。2.在缺氧6h和12h时,滋养细胞中的Cyr61表达增加；随着缺氧时间延长达24h和48h后,该蛋白表达下调（P<0.05）。结论低氧环境可以诱导滋养细胞中Cyr61的产生；但是随着缺氧时间的延长,滋养细胞中的Cyr61表达下调。第四部分子痫前期患者外周血清干预下绒毛外滋养细胞中Cyr61表达下调在子痫前期发病中的相关研究目的研究绒毛外滋养细胞在正常孕妇和子痫前期患者外周血清干预下,该细胞中Cyr61的表达情况。方法1.采用细胞免疫荧光法检测滋养细胞中Cyr61的表达定位。2.实时荧光定量PCR检测子痫前期患者外周血清处理24h后,滋养细胞中Cyr61转录水平的表达情况。3.蛋白印迹法检测子痫前期患者外周血清处理24h后,滋养细胞中Cyr61的蛋白水平的表达。结果1.细胞基质蛋白Cyr61主要表达在滋养细细胞的胞浆中,部分表达子在细胞核中。2.与正常孕妇外周血清干预相比,滋养细胞经子痫前期外周血清处理后,该细胞中Cyr61转录和蛋白水平均下降（P<0.05）。结论子痫前期孕妇外周血清可下调滋养细胞中Cyr61的表达,从而说明该蛋白的下调可能与子痫前期发病有关。
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