FK228对TNFα诱导HepG2细胞NF-κB活化的影响及机制研究

论文摘要

目的：研究FK228对TNFα诱导的人肝癌细胞HepG2核转录因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）活化及其NF-κB调节的相关基因转录的影响，探讨FK228的抗肿瘤作用机制和潜在的抗炎机制，为下一步FK228体内实验及其临床应用提供理论依据。方法：培养HepG2细胞于对数生长期分别用TNFα刺激和FK228+TNFα共同作用，Western blot分析细胞核中NF-κBp65及其细胞浆中抑制因子IκBα的表达；运用流式细胞术测定细胞凋亡率改变；用RT-PCR技术检测FK228对TNFα激活的HepG2细胞凋亡相关基因Bcl-2和炎症相关基因IL-6、IL-8 mRNA表达的影响。实验数据用均数±标准差（（?）±s）表示，用SPSS11.5软件作统计分析。采用ANOVA和LSD进行组间比较和两两比较，P＜0.05为差异具有统计学意义。结果：Western Blot结果显示TNFα（20ng／ml）刺激30min即能诱导肝癌细胞HepG2的NF-κBp65的核转移，组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228（4ng／ml～32ng／ml）能抑制TNFα诱导的NF-κBp65的活化，各干预组（FK228+TNFα）中FK228各剂量组与TNFα刺激组均有显著差异（P＜0.05）；FK228减少胞浆中IκBα的降解且各组之间差异均有统计学意义（P＜0.01）；流式细胞检测结果显示，FK228干预组（FK228+TNFα）细胞凋亡率15.51±0.39％明显高于TNFα刺激组凋亡率4.05±0.30％，且差异具有统计学意义（P＜0.01）；RT-PCR检测显示，FK228能明显减少TNFα诱导的Bcl-2、IL-6、IL-8 mRNA的表达。结论：1．TNFα能激活人肝癌细HepG2的NF-κB，而NF-κB可能参与了抗凋亡蛋白Bcl-2及炎症细胞因子IL-6、IL-8的表达调控，且在一定程度上抑制细胞凋亡，促进炎症发生发展。2．FK228能抑制TNFα诱导的HepG2中NF-κB激活水平，且可能通过对NF-κB的抑制，下调抗凋亡因子Bcl-2的表达，增加HepG2凋亡。FK228还能下调与炎症密切相关的细胞因子IL-6、IL-8mRNA水平，预示其潜在的抗炎作用。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略语
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 细胞株
• 2.1.2 药物
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 主要仪器设备
• 2.2 方法
• 2.2.1 细胞培养
• 2.2.2 药物处理及分组
• 2.2.3 Western blot检测NF-κBp65和IκBα表达
• 2.2.3.1 INFα刺激HepG2细胞
• 2.2.3.2 FK228和TNFα刺激HepG2细胞
• 2.2.3.3 胞浆蛋白和核蛋白的提取
• 2.2.3.4 Western blot分析
• 2.2.4 流式细胞术测细胞凋亡
• 2.2.5 RT-PCR检测Bcl-2、IL-6、IL-8mRNA的表达
• 2.2.5.1 细胞总RNA提取
• 2.2.5.2 细胞总RNA质量鉴定
• 2.2.5.3 逆转录
• 2.2.5.4 PCR扩增Bcl-2、IL-6、IL-8基因
• 2.2.6 统计学处理
• 第三章 结果
• 3.1 TNFα诱导HepG2细胞核中NF-κB的蛋白表达
• 3.2 FK228对TNFα诱导HepG2细胞核中NF-κB及胞浆IKBα表达的影响
• 3.3 FK228对TNFα诱导HepG2细胞凋亡的影响
• 3.4 FK228对NF-κB调节的相关基因mRNA表达的影响
• 3.4.1 总RNA提取及鉴定
• 3.4.2 FK228对Bcl-2、IL-6、IL-8 mRNA表达的影响
• 第四章 讨论
• 4.1 肝癌的治疗现状
• 4.2 HDIs的抑瘤机制
• 4.3 FK228对NF-κB活化的影响
• 4.3.1 NF-κB的一般性质
• 4.3.2 NF-κB的激活
• 4.3.3 NF-κB是重要的药物靶
• 4.3.4 FK228对TNFα激活NF-κB的影响
• 4.3.4.1 TNFα能激活HepG2细胞NF-κB
• 4.3.4.2 FK228抑制TNFα对HepG2细脃NF-κB的激活
• 4.4 FK228抑制NF-κB的生物学效应
• 4.4.1 FK228增加HepG2细胞凋亡
• 4.4.2 FK228降低炎症因子IL-6、IL-8转录
• 4.5 小结与展望
• 第五章 结论
• 参考文献
• 第六章 文献综述
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果