生脉注射液药效物质基础研究

论文摘要

生脉注射液源于张元素《医学启源》的“生脉散”,该品种最初由华西医科大学研制,是由红参、麦冬和五味子经提取后制成的灭菌水溶液,现收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十五册（WS3-B-2865-98）,2001年被列为国家中药保护品种。临床上广泛用于心肌梗塞、心源性休克、感染性休克等症。为了明确生脉注射液的药效物质基础,弄清红参、麦冬和五味子对生脉注射液药效的相互影响,提高生脉注射液质量标准,本文在前期研究的基础上对生脉注射处方药材的化学成分以及它们对药效的影响进行了深入研究。本文首先对红参、麦冬和五味子的化学成分进行了系统的提取、分离和结构鉴定。从麦冬中共分得15个化合物,确定了其中14个化合物的结构,它们分别为：25（R）-鲁斯可皂苷元-1-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-[β-D-吡喃木糖基-（1→3）]-β-D-吡喃岩藻糖苷（25（R）-ruscogenin-1-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→>2）-[β-D-xylopyranosyl-（1→3）]-β-D-fucopyranoside MD-2）;25（R）-Δ5（6）-烯-螺甾-3β,14α-二羟基-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-[β-D-吡喃木糖基-（1→4）]-β-D-吡喃葡萄糖苷(25（R）-spirost-5-ene-3（3β,14a-diol-3-O-a-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-[β-D-xyopyranosyl（1→4）]-β-D-glucopyranoside MD-3）;25（R）-Δ5（6）-烯-螺甾-3β,14α-二羟基-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷（25（R）-spirost-5-ene-3β,14a-diol-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-β-D-glucopyranoside MD-4）; 25（R）-Δ5（6）烯-螺甾-3β,14α,17α-三羟基-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-[β-D-吡喃木糖基-（1→4）]-β-D-吡喃葡萄糖苷（25（R）-ophiopogenin-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl （1→2）]β-D-xylopyranosyl-（1→4）]-β-D-glucopyranosyl MD-5）;25（R）-Δ5（6）烯-螺甾-3β-羟基-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-[β-D-毗喃木糖基-（1→3）]-β-D-吡喃葡萄糖苷（25（R）-spirost-5-en-3-ol-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl（1→2）]β-D-xylopyranosyl-（1→3）]-β-D-glucopyranosyl MD-6）;25（R）-Δ5（6）-烯-螺甾-3β,14α,17α-三羟基-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-β-D-毗喃葡萄糖苷〔25（R）-ophiopogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl（1→2）-β-D-glucopyranosyl MD-8); 25（S）-鲁斯可皂苷元1-O-β-D-吡喃岩藻糖3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（25（S）-ruscogenin1-O-β-D-fucopyranoside3-O-α-rhamnopyranoside MD-9）;25（S）-鲁斯可皂苷元-1-O-p-D-吡喃木糖基-（1→2）-β-D-吡喃岩藻糖苷（25（S）-ruscogenin-1-O-β-D-xylopyranosyl-（1→2）-β-D-fucopyranoside MD-11）;25（S）-鲁斯可皂苷元1-O-α-L-吡喃鼠李糖（1→2）-β-D-吡喃木糖苷（25 （S）-ruscogenin-1-O-α-L-rhamnopyranosyl（1→2）-β-D-xylopyranoside MD-12）;25（S）-鲁斯可皂苷元1-O-β-D-吡喃木糖基3-O-a-L-吡喃鼠李糖苷（25（S）-ruscogenin-1-O-β-D-xylopyranosyl-3-O-α-L-rhamnopyranoside MD-13）;25（R）-Δ5（6）烯-螺甾-3β,17α-二羟基-3-O-a-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-[β-D-吡喃木糖基-（1→4）]-[β-D-吡喃葡萄糖苷（25（R）-pennogenin3-O-[α-L-rhamnopyranosyl（1→2）]β-D-xylopyranosyl-（1→4）]-β-D-glucopyranosyl MD-14）;25（S）-△5（6）-烯-螺甾-3β-羟基-3-O-a-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-[β-D-吡喃木糖基-（1→3）]-β-D-吡喃葡萄糖苷（25（S）-spirost-5-en-3-ol-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl（1→2）]β-D-xylopyranosyl-（1→3）]-β-D-glucopyranos yl MD-16）;26-O-p-D-葡萄糖基-25（S）-Δ5（6）,Δ20（22）-二烯-呋甾-1 p,3D,26-三羟基-1-O-β-D-吡喃岩藻糖基-3-O-a-L-吡喃鼠李糖苷（26-O-β-D-glucopyranosyl-25 （S）-furost-5,20（22）-dien-1β,3β,26-trihydroxy-1-O-β-D-fucopyranosyl-3-O-α-L-rhamnop yranoside MD-17）;26-0-p-D-葡萄糖基-25（S）-Δ5（6）-烯-呋甾-1 p,3p,22α,26-四羟基-1-O-β-D-吡喃岩藻糖基-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（26-O-β-D-glucopyranosyl-25 （S）-furost-5-ene-1β,3β,22ξ,26-tetrahydroxy-1-O-β-D-fucopyranosyl-3-O-α-L-rhamnopyranoside MD-18）,其中MD-11、MD-13、MD-16、MD-17和IMD-18为新化合物。另外从五味子中共分得6个化合物,确定了其中5个化合物的结构,他们分别为：五味子醇乙（Schizandrol B WWZ-1）,羊毛甾醇（Lanosterol WWZ-2）,恰米醛（chamigrenal WWZ-4）,当归戈米辛P（Angeloylgomisin P WWZ-5）,五味子醇甲（Schizandrol A WWZ-6）。同时从红参中共分得12个化合物,他们分别为：人参皂苷Rb1,人参皂苷Rb2,人参皂苷Rb3,人参皂苷Rc,人参皂苷Rd,人参皂苷Rg1,人参皂苷Rg2,人参皂苷Re,人参皂苷Rf,人参皂苷Rh1,人参皂苷Rh2,人参皂苷Ro。本文还首次对生脉注射液中来源于红参的人参皂苷类成分,来源于五味子的木脂素类成分以及来源于麦冬的甾体皂苷类成分进行了含量测定。文献表明此类成分为生脉注射液的有效成分。从生脉注射液中共测得来自红参的皂苷类成分共9种,它们分别是人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc和人参皂苷Rg2。从生脉注射液中共测得2种来自五味子的木质素类成分,它们分别是五味子醇甲,五味子醇乙。本文从生脉注射液中没有检测到来源于麦冬的皂苷类成分。结果表明,不同厂家不同批次的生脉注射液中上述成分的含量差异较大,具体范围在人参皂苷Re：93-120μg·mL-1；人参皂苷Rg1：74-100μg·mL-1；人参皂苷Rf：26-72μg·mL-1;人参皂苷Rb1：183-340μg·mL-1；人参皂苷Rg2：11-17μg·mL-1；人参皂苷Rc：120-178μg·mL-1；人参皂苷Rb2：86-195μg·mL-1；人参皂苷Rb2：11-17μg·mL-1；人参皂苷Rd:37-59μg·mL-1；五味子醇甲：4-15μg·mL-1；五味子醇乙：0.4-1.6μg·mL-1；之间。最后根据上述研究结果,分别配制了由上述9种人参皂苷和2种木脂素组成的混合注射液以及由9种人参皂苷组成的单一注射液和2种木脂素组成的单一注射液共三种注射液,并以市售生脉注射液为对照组对大鼠心肌梗死后心力衰竭的保护作用进行了对比研究。结果表明,市售生脉注射液、人参皂苷和木脂素组成的混合注射液以及人参皂苷单一注射液对大鼠心肌梗死后心力衰竭均具有明显保护作用,三者作用相当,而来自五味子的木脂素类成分对心力衰竭没有保护作用,同时对人参皂苷也没有协同作用。本论文的研究结果表明,生脉注射液对大鼠心肌梗死后的心力衰竭均具有明显保护作用,其主要药效物质是来源于红参的人参皂苷。本论文为寻找生脉注射液的药效物质基础以及生脉注射液的二次开发提供了科学依据。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 绪言
• 1.1 红参
• 1.1.1 红参化学成分的研究现状
• 1.1.2 红参的药理研究
• 1.2 麦冬
• 1.2.1 麦冬化学成分的研究现状
• 1.2.2 麦冬的药理作用
• 1.3 五味子
• 1.3.1 五味子化学成分的研究现状
• 1.3.2 五味子的药理研究
• 1.4 生脉注射液的研究现状
• 1.4.1 药理作用
• 1.4.2 现代临床应用
• 1.4.3 生脉注射液中化学成分的研究
• 1.5 研究目的
• 参考文献
• 第二章 生脉注射液处方药材的化学成分研究
• 2.1 材料与仪器
• 2.1.1 实验仪器
• 2.1.2 试剂及材料
• 2.2 麦冬化学成分的分离与鉴定
• 2.2.1 麦冬药材
• 2.2.2 提取与分离
• 2.2.3 麦冬化学成分的鉴定
• 2.3 五味子化学成分的分离与鉴定
• 2.3.1 五味子实验药材
• 2.3.2 五味子的提取与分离
• 2.3.3 味子化学成分的结构鉴定
• 2.4 红参化学成分的分离与鉴定
• 2.5 小结
• 参考文献
• 第三章 生脉注射液中各种单体的含量测定
• 3.1 实验仪器、设备与试剂
• 3.2 生脉注射液中人参皂苷含量测定
• 3.2.1 对照品及样品
• 3.2.2 对照品溶液、供试品溶液的制备
• 3.2.3 分析条件
• 3.2.4 检测限
• 3.2.5 线性
• 3.2.6 精密度
• 3.2.7 重现性
• 3.2.8 稳定性实验
• 3.2.9 加样回收率
• 3.2.10 HPLC-ESI-MS鉴定皂苷成分
• 3.2.11 样品分析
• 3.3 生脉注射液中木脂素含量的测定
• 3.3.1 对照品纯度及来源
• 3.3.2 对照品溶液、供试品溶液的制备
• 3.3.3 分析条件
• 3.3.4 检测限
• 3.3.5 线性关系
• 3.3.6 精密度
• 3.3.7 重现性
• 3.3.8 稳定性实验
• 3.3.9 加样回收率实验
• 3.3.10 样品分析
• 3.4 结论
• 参考文献
• 第四章 生脉注射液中人参皂苷及木脂素类成分对大鼠心力衰竭的保护作用
• 4.1 材料和方法
• 4.1.1 实验动物
• 4.1.2 药品与试剂
• 4.1.3 实验仪器
• 4.1.4 实验方法
• 4.1.5 统计方法
• 4.2 实验结果
• 4.2.1 一般情况
• 4.2.2 对HF大鼠心率及血压的影响
• 4.2.3 对大鼠LVSP、±dp/dtmax及LVEDP的影响
• 4.2.4 对HF大鼠血清MDA、SOD、GSH-Px的影响
• 4.3 结论
• 参考文献
• 第五章 结论
• 5.1 结果与讨论
• 5.2 展望
• 附录
• 附图
• 作者简介及学位期间取得的科研成果
• 致谢