TLR3在HSV-1感染小鼠NSCs中的作用研究

论文摘要

目的：1.探讨TLR3在HSV-1感染小鼠NSCs中的作用,研究HSV-1通过TLR3对NF-κB转录活性及细胞因子TNF-α和IL-10表达的影响。2.研究TLR3在HSV-1感染小鼠NSCs中对IRF3磷酸化及IFN-β表达的影响。材料和方法：1.体外分离并用含mEGF、mbFGF和B27的NSCs生长培养基培养小鼠胚胎皮层NSCs,通过免疫荧光方法检测NSCs标志物的表达并对NSCs分化能力进行鉴定。2. HSV-1感染原代培养的第3代NSCs,通过免疫荧光、RT-PCR、Western blot、 ELISA等方法分别检测TLR3、NF-κB、TNF-α、IL-10mRNA和蛋白的表达,同时研究NF-κB通路抑制剂PDTC及TLR3中和抗体对NF-κB通路的影响。3. HSV-1感染原代培养的第3代NSCs,并构建沉默TLR3（?）勺慢病毒载体感染NSCs,抑制TLR3的表达,通过免疫荧光、RT-PCR、Western blot、ELISA等方法研究NSCs中TLR3和IRF3及IFN-β的表达特点。结果：1.正常状态下,NSCs表达TLR3和NF-κB:被HSV-1感染的NSCs,核内NF-κB蛋白表达明显增强,同时炎性细胞因子TNF-α、IL-10在mRNA和蛋白水平的表达均上调。PDTC （?）丁抑制NF-B活化,使核内NF-κB蛋白表达下调,导致细胞内TNF-α、IL-10mRNA和蛋白的表达下调。用TLR3中和抗体阻断NSCs表面TLR3后,核内NF-κB蛋白表达下调,INF-α、IL-10mRNA和蛋白也明显下调,NSCs通过天然免疫抗病毒作用减弱,表现为HSV-1gD mRNA在细胞内表达明显增强,病毒滴度增高。2. NSCs被HSV-1感染后,IRF3mRNA表达上调,其蛋白磷酸化也明显增强,同时IFN-β mRNA和蛋白的表达也相应上调。用慢病毒抑制TLR3表达后,IRF3mRNA及其蛋白磷酸化明显下调,同时IFN-β mRNA和蛋白的表达也相应下调,并且HSV-1在细胞内复制增加,病毒滴度增高。结论：1. NSCs是HSV-1的完全容许细胞。正常NSCs表达TLR3、NF-κB;被HSV-1感染的NSCs通过TLR3活化NF-κB,从而上调炎性细胞因子TNF-α、IL-10的表达,发挥天然免疫抗病毒作用。2. HSV-1感染NSCs后,TLR3表达上调,促进IRF3磷酸化后核转位,从而上调IFN-β的表达,激活细胞天然免疫,抵抗HSV-1感染。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第一章 ：HSV-1通过TLR3、NF-κB通路诱导小鼠NSCs炎性因子表达
• 引言
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 参考文献
• 第二章 ：HSV-1通过TLR3影响小鼠NSCs IRF3磷酸化及IFN-β的表达
• 引言
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 参考文献
• 结论
• 综述
• 参考文献
• 博士研究生在读期间的学术成果
• 致谢