血必净在门脉高压症大鼠经历无肝期后对肾脏损伤的保护作用

论文摘要

目的:近半个世纪以来,依托现代外科技术、器官保存和围手术期处理技术的迅猛发展,以飞跃进步的移植免疫学和分子生物学为后盾,肝脏移植业已成为目前治疗终末期肝病的唯一有效手段。我国肝移植对象绝大多数为成人终末期肝炎后肝硬化,具有门脉高压症,门体间有较多侧支循环等特点。基于此特点手术操作相对简单、花费少的经典非转流原位肝移植在我国有很大的应用前景。然而经典非转流原位肝移植病人在约1小时的无肝期中,由于不采用静脉转流,肾脏要经历一个缺血再灌注的过程,此过程可造成肾脏细胞损害,是肝移植术后急性肾功能不全的危险因素。“血必净”是我国著名急救医学专家王今达教授经三十余年科学临床实践研制成的国家二类新药。本实验旨在探讨血必净注射液在门脉高压症大鼠经历无肝期后对肾脏的保护作用,从而为解决临床上肝移植术后急性肾功能不全寻找一种新的药物。方法:选取健康雄性Wistar大鼠110只,体重250-300g,随机选取15只,10只作为假手术组（SOG）,5只用来证明门脉高压模型,其余95只大鼠一期手术部分结扎、缩窄门静脉并植入标志环,3周后建立门脉高压症模型（PHM）,从中随机留取5只用来证明门脉高压模型。留取的5只正常大鼠和5只门脉高压症模型大鼠分别行门静脉测压和造影,观察门脉高压和门体间侧支循环形成情况,测量食管下段粘膜下面积。其余90只大鼠行二期手术,开腹后首先寻找并去除标志环使门静脉复张,而后同时阻断第一肝门和肝后下腔静脉,60分钟后再开放,根据复流后采集标本的时间随机分为缺血再灌注6小时组（I/R6 h）、12小时组（I/R12 h）、24小时组（I/R24h）、血必净6小时组（XBJ6h）、12小时组（XBJ12h）、24小时组（XBJ24h）、乌司他丁6小时组（UTI 6 h）、12小时组（UTI 12 h）、24小时组（UTI 24h）共9组。从下腔静脉抽血做血清ALT,AST,BUN,Cr的测定,评价肝肾功能;切取小块肝、肾组织观察光镜下组织结构变化;切取小块肾组织作透射电镜观察;切取小块肾组织,称重后分别匀浆,测量肾脏组织中脂质过氧化产物丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的含量。应用统计学软件对数据进行分析。结果:一期手术后3周可成功制成门脉高压症模型大鼠,开腹后可见:门静脉直径较正常大鼠明显增宽,内脏血管曲张淤血明显;PHM大鼠自由门静脉压力（FFP）15.6±3.1mmHg,较正常大鼠FFP 7.7±1.7mmHg明显升高（P<0.05）,门静脉造影显示:PHM大鼠门静脉系统血管迂曲扩张,食管下段及胃底大量曲张的静脉,可见门体间开放的侧支;正常大鼠门静脉系统血管走行自然,门体间未见交通支。食管下段组织横截面病理切片图象分析显示PHM大鼠单位静脉面积33.582±6.425μ㎡,较正常大鼠单位静脉面积5.620±1.301μ㎡明显升高（P<0.05）。二期手术去除标志环后,门静脉复张,门静脉造影可见食管下段及胃底曲张的侧支扩张减轻,门静脉缩窄部分完全复张。I/R组血清ALT,AST于再灌注6小时就明显升高,12小时达到顶峰,各时段I/R组与各时段SOG组比较,ALT,AST均明显升高（P<0.01）;各时段XBJ组与各时段I/R组比较,ALT,AST均明显降低（P<0.01）;各时段XBJ组与各时段UTI组比较,ALT,AST无显著性差异（P>0.05）;I/R组血清BUN,Cr于再灌注6小时开始升高,24小时达到顶峰,各时段I/R组与各时段SOG组比较有显著性差异（P<0.01）;XBJ6h组与I/R6h组比较,血清BUN,Cr降低（P<0.05）;XBJ12h组与I/R12h组,XBJ24h组与I/R24h组相比较,血清BUN,Cr明显降低（P<0.01）;各时段XBJ组与各时段UTI组比较,血清BUN,Cr无显著性差异（P>0.05）。肾脏组织中的MDA于再灌注6小时就显著升高,24小时达到顶峰,各时段I/R组与各时段SOG组比较,MDA均明显升高（P<0.01）;各时段XBJ组与各时段I/R组比较,MDA均明显降低（P<0.01）;各时段XBJ组与各时段UTI组比较,MDA无显著性差异（P>0.05）。SOD情况与MDA大致相反。光镜下肾脏R/I组近曲小管上皮细胞肿胀,可见散在的近曲小管上皮细胞核固缩碎裂,胞浆浓缩,结构消失并分散成多块,小管腔内可见细胞碎片,肾小管上皮细胞坏死,集合管腔内可见管型,肾小管管腔扩大,刷状缘变短;XBJ组肾脏损伤明显减轻,肾小管上皮细胞轻度坏死,部分脱落肾小管腔内,肾小管内可见少量蛋白。光镜下见R/I组肝细胞水肿明显,呈气球样,细胞核周围胞浆透亮,部分出现变性、坏死,细胞核缺失;XBJ组肝细胞轻度水肿,肝细胞坏死减轻。TEM下观察肾脏近曲小管超微结构的变化,R/I组细胞质局部有轻度水肿,细胞嵴排列稍紊乱,重者内有大小不等的空泡,线粒体部分或大部分嵴和膜融合或消失,粗面内质网有严重脱颗粒现象,微绒毛数量显著减少;XBJ组组织损伤减轻,细胞质尚有几处大小不等的空泡,线粒体部分嵴和膜融合或消失,粗面内质网有轻度脱颗粒现象,微绒毛数量稍减少。结论:采用改进的门静脉缩窄方法,可成功的制作出肝前性门脉高压症大鼠模型。该方法简单、确切、可重复性好,而且门脉高压症是可恢复的,适合于肝移植的研究。门静脉高压症大鼠模型经历无肝期后肾损伤以再灌注后12-24小时最为严重。血必净注射液对门静脉高压症大鼠经历无肝期后肾损伤有有效的保护作用。血必净注射液在门静脉高压症大鼠经历无肝期后对肾损伤保护作用与乌司他丁相当。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 血必净在门脉高压症大鼠经历无肝期后对肾脏损伤的保护作用
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 肝移植术后影响肾功能因素的研究进展
• 致谢
• 个人简历