本文主要研究内容
作者刘雨琦（2019）在《LGALS1和LGALS3与JUNO、IZUMO1和CD9的相互作用》一文中研究指出：有性生殖是高等真核生物繁衍后代的基本途径,精子与卵子的融合包括配子结合与膜融合两个过程,是有性生殖的关键步骤。哺乳动物精卵融合是一个多分子参与的过程,但其详细的细胞分子机制仍不明确。精子上的IZUMO1和卵子上的JUNO及CD9是精卵膜融合过程中已知不可或缺的膜蛋白。其中IZUMO1与JUNO相互识别介导精卵粘附,然而分别表达IZUMO1和JUNO的体细胞能互相结合但不能融合。CD9的功能未知。因此,精卵融合过程应该还存在其他配子蛋白协助IZUMO1、JUNO和CD9。本实验通过酵母双杂交技术和间接免疫荧光技术研究了半乳糖苷凝集素家族的两个成员LGALS1和LGALS3与IZUMO1、JUNO和CD9的相互作用。首先,克隆了大鼠lgals1和lgals3的cDNA。构建了pGAD-lgals1和pGAD-lgals3的酵母表达载体,分别与实验室已有的pGBK-Juno、pGBK-Izumo1和pGBK-Cd9进行了酵母双杂交。结果发现LGALS1与JUNO存在相互作用,但与IZUMO1、CD9不存在相互作用;LGALS3与JUNO和IZUMO1均不存在相互作用。构建pGEX-lgals1原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达GST-LGALS1融合蛋白。分离纯化GST-LGALS1融合蛋白免疫小鼠获得GST-LGALS1腹水多克隆抗体,通过戊二醛交联法去除其中的GST抗体。以纯化后的LGALS1腹水多抗进行了大鼠睾丸、卵巢切片的免疫组化实验。结果显示:LGALS1存在于雄性大鼠睾丸的支持细胞和精子发育各个时期的细胞质中;在雌性大鼠卵巢中LGALS1定位于的卵丘细胞和卵细胞的细胞质内及细胞膜上。用纯化后的LGALS1腹水多抗和JUNO抗体对精子、卵子间接免疫荧光,以探索LGALS1的亚细胞定位及其与JUNO的共定位情况。结果显示:LGALS1位于大鼠精子头部和前半段尾部;MII期卵子的透明带和细胞膜上,且LGALS1与JUNO共定位于MII期卵子细胞膜上。本实验发现LGALS1与JUNO存在相互作用,且LGALS1在生殖组织和生殖细胞均有表达,推测LGALS1可能参与了精卵膜融合过程,为深入解析精卵融合的分子机制提供新的线索。
Abstract
you xing sheng shi shi gao deng zhen he sheng wu fan yan hou dai de ji ben tu jing ,jing zi yu luan zi de rong ge bao gua pei zi jie ge yu mo rong ge liang ge guo cheng ,shi you xing sheng shi de guan jian bu zhou 。bu ru dong wu jing luan rong ge shi yi ge duo fen zi can yu de guo cheng ,dan ji xiang xi de xi bao fen zi ji zhi reng bu ming que 。jing zi shang de IZUMO1he luan zi shang de JUNOji CD9shi jing luan mo rong ge guo cheng zhong yi zhi bu ke huo que de mo dan bai 。ji zhong IZUMO1yu JUNOxiang hu shi bie jie dao jing luan nian fu ,ran er fen bie biao da IZUMO1he JUNOde ti xi bao neng hu xiang jie ge dan bu neng rong ge 。CD9de gong neng wei zhi 。yin ci ,jing luan rong ge guo cheng ying gai hai cun zai ji ta pei zi dan bai xie zhu IZUMO1、JUNOhe CD9。ben shi yan tong guo jiao mu shuang za jiao ji shu he jian jie mian yi ying guang ji shu yan jiu le ban ru tang gan ning ji su jia zu de liang ge cheng yuan LGALS1he LGALS3yu IZUMO1、JUNOhe CD9de xiang hu zuo yong 。shou xian ,ke long le da shu lgals1he lgals3de cDNA。gou jian le pGAD-lgals1he pGAD-lgals3de jiao mu biao da zai ti ,fen bie yu shi yan shi yi you de pGBK-Juno、pGBK-Izumo1he pGBK-Cd9jin hang le jiao mu shuang za jiao 。jie guo fa xian LGALS1yu JUNOcun zai xiang hu zuo yong ,dan yu IZUMO1、CD9bu cun zai xiang hu zuo yong ;LGALS3yu JUNOhe IZUMO1jun bu cun zai xiang hu zuo yong 。gou jian pGEX-lgals1yuan he biao da zai ti ,zhuai hua dao da chang gan jun BL21(DE3)zhong yong IPTGyou dao biao da GST-LGALS1rong ge dan bai 。fen li chun hua GST-LGALS1rong ge dan bai mian yi xiao shu huo de GST-LGALS1fu shui duo ke long kang ti ,tong guo wu er quan jiao lian fa qu chu ji zhong de GSTkang ti 。yi chun hua hou de LGALS1fu shui duo kang jin hang le da shu gao wan 、luan chao qie pian de mian yi zu hua shi yan 。jie guo xian shi :LGALS1cun zai yu xiong xing da shu gao wan de zhi chi xi bao he jing zi fa yo ge ge shi ji de xi bao zhi zhong ;zai ci xing da shu luan chao zhong LGALS1ding wei yu de luan qiu xi bao he luan xi bao de xi bao zhi nei ji xi bao mo shang 。yong chun hua hou de LGALS1fu shui duo kang he JUNOkang ti dui jing zi 、luan zi jian jie mian yi ying guang ,yi tan suo LGALS1de ya xi bao ding wei ji ji yu JUNOde gong ding wei qing kuang 。jie guo xian shi :LGALS1wei yu da shu jing zi tou bu he qian ban duan wei bu ;MIIji luan zi de tou ming dai he xi bao mo shang ,ju LGALS1yu JUNOgong ding wei yu MIIji luan zi xi bao mo shang 。ben shi yan fa xian LGALS1yu JUNOcun zai xiang hu zuo yong ,ju LGALS1zai sheng shi zu zhi he sheng shi xi bao jun you biao da ,tui ce LGALS1ke neng can yu le jing luan mo rong ge guo cheng ,wei shen ru jie xi jing luan rong ge de fen zi ji zhi di gong xin de xian suo 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自内蒙古大学的刘雨琦，发表于刊物内蒙古大学2019-08-13论文，是一篇关于半乳糖苷凝集素论文,蛋白相互作用论文,内蒙古大学2019-08-13论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自内蒙古大学2019-08-13论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。