浏阳市葛家乡卫生院检验科湖南浏阳410328
【摘要】目的：探讨小细胞低色素性贫血患者的红细胞相关参数与阻抗法血小板计数假性增高之间的联系和影响程度。方法：选择2014年1月-2015年1月在我院诊治的159例小细胞低色素性贫血患者为贫血组，以100例成年健康体检者为对照组，分别检测血常规，同时，对两组的血小板均予以手工法计数复检，并对两组的红细胞、血小板相关参数，以及红细胞相关参数与阻抗法血小板计数之间的相关性进行回顾分析。结果：贫血组各分组阻抗法血小板计数结果均高于手工法血小板计数结果，有显著差异（P<0.05），对照组阻抗法血小板计数结果与手工法血小板计数结果，无显著差异（P>0.05）；两组间血常规相关指标水平差异均有统计学意义（P<0.05），其中，以阻抗法PLT计数中重度增高组（B3）与对照组差异最显著，阻抗法PLT计数轻中度增高组（B2）与对照组差异较显著，以阻抗法PLT计数正常组（B1）与对照组差异最不显著；小细胞低色素性贫血患者的红细胞相关参数中，红细胞平均体积（MCV）对血小板计数影响最大，红细胞MCV越小，血小板计数误差越大。结论：红细胞平均体积（MCV）明显减低非均一性（RDW增高）的小细胞低色素性贫血患者阻抗法血小板计数增高，为小细胞性假性增高，应该用手工法或镜检复核校正后报告。
【关键词】小细胞低色素性贫血；血小板计数；假性增高；阻抗法；相关性
小细胞低色性贫血[1]是按红细胞形态学进行分类的一种贫血类型，是临床上十分常见的一类贫血性疾病，它主要包括缺铁性贫血（IDA）、珠蛋白生成障碍性贫血、铁粒幼细胞性贫血（SA）和慢性疾病性贫血，临床上以缺铁性贫血最为常见，其次为珠蛋白生成障碍性贫血。随着全自动血液分析仪的全面普及和广泛应用，在贫血的形态学分型和诊断方面，与血细胞镜检和传统手工方法相比，血液分析仪无论是在计数的重复性和准确性方面，还是计数的速度和参数信息等方面，都有着不可比拟的优势，但是，由于仪器计数原理设计方面存在的自身无法弥补的缺陷，目前，血液分析仪还不能完全代替血细胞镜检和其他传统手工方法，特别是在某些特殊和异常的病例中，仪器计数误差和错误在所难免，小细胞低色素性贫血阻抗法血小板计数假性增高的现象在临床上比较常见，本文选择按贫血的形态学分类标准[2]进行确诊159例小细胞低色性贫血患者的血液细胞分析资料，旨在对这类贫血类型患者的血小板计数假性增高与红细胞参数的相关性方面进行回顾性分析。
1材料与方法
1.1仪器迈瑞BC-3000plus全自动血液分析仪；浏阳市医用仪具厂生产EDTA-K2抗凝紫色管；日本生产Olympus双目光学显微镜；上海求精生化仪器有限公司生产的血小板计数板；姜堰市健华医疗器械有限公司生产一次性20ul微量采血管。
1.2试剂迈瑞BC-3000plus全自动血液分析仪配套试剂。1%草酸铵稀释液，严格按照《全国临床检验操作规程》第三版的要求配制[3]。校正品和质控品均为迈瑞公司原厂配套SFDA注册校正品和质控品。
1.3标本本院门诊及住院初诊患者159例和成年健康体检者100例共259人，均取半坐卧位，准确一次性采取前臂手背静脉或肘部静脉血2ml于紫色中空采血管中，缓慢颠倒，让血液与抗凝剂充分混匀，并于2h内完成全血细胞分析和手工法血小板计数。
1.4方法
1.4.1贫血组分组法以阻抗法血小板计数数目的增高程度和PCT结果的显示有无分为PLT计数正常组（100-300）、PCT显示有结果，PLT计数轻中度增高（301-600）、PCT显示有结果和PLT计数中重度增高（501-1900）、PCT显示无结果（.***）三小组。
1.4.2检测方法（1）手工法。作为临床上PLT计数参考方法，精确吸取20ul已充分混匀的血液轻轻注入0.38ml1%草酸铵稀释液中，立即混匀后，充池血小板计数板，再在显微镜下计数，以上操作严格按照《全国临床检验操作规程》第三版的要求操作[4]，手工计数3次取平均值。（2）仪器法。用原厂配套SFDA注册校正品校正定值后，再采用高、中、低三个浓度的质控品每季度做一次室内质控，确保仪器性能状态良好。然后严格按照仪器操作规程要求对同一标本进行测定，于2h内完成计数。
1.5统计学方法
本组研究采用SPSS10.0统计学软件进行数据的分析和处理，计量资料采用（）表示，各组间均数比较采用方差分析，相关性分析采用Pearson相关性分析，以P<0.05为差异具有统计学意义。
2结果
2.1贫血组和对照组阻抗法与手工法PLT计数结果比较如表1所示，贫血组各分组阻抗法与手工法PLT计数结果均有显著差异（P<0.05），对照组阻抗法与手工法PLT计数结果无显著差异（P>0.05）。
注：B1：阻抗法PLT计数正常（100-300）、PCT显示有结果；B2：阻抗法PLT计数轻中度增高（301-600）、PCT显示有结果；B3：阻抗法PLT计数中重度增高（501-1900）、PCT显示无结果（.***）
2.2贫血组和对照组血常规相关参数结果比较如表2所示，两组间血常规相关指标水平差异均有统计学意义（P<0.05），贫血分组中，阻抗法PLT计数正常组（B1）与对照组比较，除RBC、MPV、PCT和P-LCR外，其他血常规相关指标水平差异均有统计学意义（P<0.05）；阻抗法PLT计数轻中度增高组（B2）与对照组比较，除MPV外，其他血常规相关指标水平差异均有统计学意义（P<0.05）；阻抗法PLT计数中重度增高组（B3）与对照组比较，全部血常规相关指标水平差异均有统计学意义（P<0.05）；阻抗法PLT计数轻中度增高组（B2）与阻抗法PLT计数正常组（B1）比较，除HB、RDW-CV、RDW-SD和MPV外，其他血常规相关指标水平差异均有统计学意义（P<0.05）；阻抗法PLT计数中重度增高组（B3）与阻抗法PLT计数轻中度增高组（B2）比较，除HB、RBC、RDW-CV和RDW-SD外，其他血常规相关指标水平差异均有统计学意义（P<0.05）；阻抗法PLT计数中重度增高组（B3）与阻抗法PLT计数正常组（B1）比较，除HB和RDW-CV外，其他血常规相关指标水平差异均有统计学意义（P<0.05）。
2.3贫血组PLT计数假性增高与RBC参数MCV水平的相关性如表2所示，贫血组PLT计数假性增高程度与RBC参数MCV水平变化规律呈负相关（P均<0.05）。
注：a与对照组比较，P＜0.05，b与B1组比较，P＜0.05，c与B2组比较，P＜0.05
B1：阻抗法PLT计数正常（100-300）、PCT显示有结果；B2：阻抗法PLT计数轻中度增高（301-600）、PCT显示有结果；B3：阻抗法PLT计数中重度增高（501-1900）、PCT显示无结果（.***）
3讨论
准确计数外周血中的血小板实非易事[5]，由于血小板体积小、无色，又易粘附的特点，因此，临床上采血计数的血小板数目，均较血液中实际血小板数目低。手工法（草酸铵法）虽然是国际参考方法，但操作繁琐，重复性差，目前，已很少使用，取而代之的，多采用血液细胞分析仪进行血小板计数。迈瑞BC-3000plus全自动血液分析仪采用阻抗法计数血小板。阻抗法血液细胞计数原理[6]，又称库尔特原理，它是利用光电二极管控制液量将血细胞悬液吸进微孔管，当每个血细胞通过微孔时，均取代等体积的电解质溶液使电阻增大产生相应脉冲，脉冲信号的大小和次数与颗粒的大小和数目成正比。阻抗法具有操作简便，重复性好的优点，但也存在不少缺陷，主要不足就是，只能依靠细胞体积大小进行分类，而不能识别细胞的种类［5］。正常红细胞直方图，在36-360fl范围内分布，红细胞主峰分布在55-110fl，波峰一般在88fl处，而小细胞低色素性贫血患者的红细胞直方图分布范围和红细胞主峰均发生左移，波峰可以左移至65fl处，甚至更低，左界可以扩展到25fl以下的区域，与血小板直方图的分布范围（2-30fl）的右界发生部分交叉与重叠，红细胞与血小板检测又在同一检测通道，特别是以固定界标法［6］为处理方式的欧美雅培系列产品，仪器容易把血液标本中的这些小RBC以及红细胞碎片误认为血小板，从而导致小细胞低色素性贫血患者血小板计数假性增高的现象［4，5，6］。
从本研究可以看出，贫血组各分组阻抗法血小板计数结果均高于手工法血小板计数结果，有显著差异（P<0.05），对照组（MCV90.0±5.0fl）阻抗法血小板计数结果与手工法血小板计数结果，无显著差异（P>0.05）；两组间血常规相关指标水平差异均有统计学意义（P<0.05），其中，以阻抗法PLT计数中重度增高组（MCV61.46±4.01fl）与对照组差异最显著，阻抗法PLT计数轻中度增高组（66.67±3.46fl）与对照组差异较显著，以阻抗法PLT计数正常组（MCV71.69±4.05fl）与对照组差异最不显著；小细胞低色素性贫血患者的红细胞相关参数中，贫血组各分组中红细胞分布宽度变异系数（RDW-CV）和红细胞分布宽度标准差（RDW-SD）两参数结果与对照组均有显著差异（P<0.05），但贫血组内部各组之间，除参数红细胞分布宽度标准差（RDW-SD）在B1组与B3组之间有显著差异外（P<0.05），其余并无显著差异（P>0.05），诸红细胞参数中，以红细胞平均体积（MCV）对血小板计数影响最大，红细胞MCV越小，血小板计数误差越大，与李先平等［7］的相关研究报道一致。本研究发现，42例（B3）电阻抗法血小板计数显著增高的患者血小板参数有一个重要特点，出现血小板压积（PCT）结果显示为“.***”的现象，同时常伴大血小板比率（P-LCR）明显升高（52.90±6.23%），笔者分析，此为小红细胞明显增多被误认为大血小板而使血小板压积显著增大超出检测上限所致，血小板平均体积（MPV）也明显升高（13.85±1.61fl），同样也是明显增多的小红细胞所致。另外，这类病人的血小板直方图通常会出异常并提示报警，主要表现为，一是正常血小板直方图峰值为6-9fl的波峰消失，右界（上界）不是与直方图横轴基线接触，而是扩大延长与横轴基线呈平行线关系；二是血小板直方图右侧往往同时出现“Pm”报警字样，提示血小板与红细胞区域交界模糊，可能存在大小血板、小红细胞、细胞碎片等情况。因此，临床上出现以上提示的病例时，应引起警惕，结合红细胞和血小板直方图以及其它血细胞参数，综合判断，高度怀疑此类血小板计数假性增高的小细胞低色素贫血患者。
综上所述，红细胞平均体积（MCV）明显减低非均一性（RDW增高）的小细胞低色素性贫血患者阻抗法血小板计数增高，为小细胞性假性增高，应该用手工法或镜检复核校正后报告。
参考文献：
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