川楝素的稳定性及其抑菌效果研究

论文摘要

川楝素具有多种生物活性,其驱虫、杀虫等功效已有很多研究。川楝素是我国传统驱蛔中药的有效成分,以其为主要原料压制的川楝素片驱蛔效果好而且迅速。川楝素对农业卫生害虫具有拒食和毒杀作用,其相应制剂对多种害虫具有良好的防治效果。并且,川楝素是一种神经-肌肉接头前突触传递阻断剂,同时具有极有效的抗肉毒效应,能诱导细胞分化、凋亡并抑制人和动物的多种肿瘤细胞繁殖,有望发展成为在研究神经递质释放机制抗肉毒和抗肿瘤方面具有应用前景的生物活性物质。在医学上,川楝素还有很好的理气止痛功能,多用来治疗胃病、肋痛、肝胆病症等。川楝素的提取方法主要有浸提法、索氏提取法、超声提取法、微波辅助提取法和超临界CO2萃取法等,测定方法主要有分光光度法、HPLC法、HPLC-MS法等。其中,超声波辅助提取及紫外可见分光光度法测定川楝素,设备投资少、操作简单、易于掌握和推广,应为川楝素提取和测定的首选方法,但目前尚未见到用正交试验对超声提取条件进行优化,也没有对紫外可见分光光度测定法进行回收率和精密度的研究。川楝素的稳定性和生物学性能受外界因素的影响很大,为确保合理有效的利用川楝素,必须掌握川楝素的稳定性参数,但关于其稳定性的研究甚少。此外,在对川楝素的多种生物活性和功效的研究中,尚未检索到川楝素抑制医学致病菌生长方面的系统研究。目的:研究超声波辅助提取川楝素的优化条件;用紫外可见分光光度法对川楝素进行测定,并对加标回收率、精密度等进行方法学研究;较系统地研究温度、溶剂、水、pH和光对川楝素稳定性的影响,为研制稳定的川楝素制剂提供基础依据;以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌和白色念珠菌为试验对象,研究川楝素对四种致病菌的最小抑菌浓度、最小杀菌浓度、抑菌环、抑菌百分率等,为评价川楝素作为抑菌中药提供基本的药效学依据。方法:1.提取:采用超声波辅助提取法对样品中的川楝素进行粗提。2.测定:用紫外可见分光光度法对粗提液进行川楝素含量测定。3.稳定性:试验了温度、溶剂、水、pH值和光照等因素对川楝素甲醇溶液稳定性的影响。4.抑菌:采用琼脂稀释法测定川楝素的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,采用纸片法测其抑菌环,并根据抑菌百分率绘制出川楝素对各种供试菌的抑菌曲线。结果:1.本文利用超声波技术,以甲醇为溶剂提取川楝素的方法,具有省时、节能、提取率高等特点。通过正交试验对提取温度（℃）、提取时间（min）、料液比、提取次数（次）等影响川楝素提取率的因素进行了优化,得出超声提取川楝素的最佳工艺条件组合为:提取温度（30℃）、提取时间（40min）、料液比（1:30）、提取次数（4次）。由极差R得出影响川楝素提取率的因素依次是:料液比,提取次数,提取温度、提取时间。2.对川楝素甲醇溶液在190～400nm扫描,得到最大波长215nm,对紫外可见分光光度法的加标回收率、精密度等进行了方法学研究,并用该方法对提取物中川楝素的含量进行了测定,结果满意。3.川楝素的稳定性受温度、溶剂的极性、水、pH值和光等的影响。川楝素在低温时比较稳定,随温度的升高稳定性降低。同一温度下,川楝素的降解率随时间的增加而增加,尤其是较高温度下更为明显。川楝素的稳定性随溶剂的极性增加而减弱。水能加快川楝素的降解,并且降解率随着水量的增加而增大。弱酸性条件下川楝素比较稳定,pH值为4左右时,川楝素最稳定。在强酸、强碱条件下,川楝素分解较快,分解率随着时间的增加而增加。川楝素遇光易分解,分解率随着时间的增加而增加。4.川楝素溶液对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌、白色念珠菌均有一定的抑制作用,川楝素对四种受试菌的最小抑菌浓度分别在7.5～30mg/mL,最小杀菌浓度在15～30mg/mL,川楝素浓度越高,作用时间越长,其抑菌效果越好。川楝素是一种很有前途的抑菌剂。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 前言
• 1.材料与方法
• 1.1 原料和试剂
• 1.2 仪器
• 1.3 菌种
• 1.4 川楝素的超声提取优化条件检测
• 1.4.1 样品制备
• 1.4.2 检测方法
• 1.4.3 提取剂的选择
• 1.4.4 提取条件的优化
• 1.5 川楝素的分光光度法测定
• 1.5.1 实验方法
• 1.5.2 吸收光谱
• 1.5.3 标准曲线
• 1.5.4 加标回收率
• 1.5.5 精密度
• 1.5.6 样品测定
• 1.6 川楝素的稳定性实验
• 1.6.1 温度的影响
• 1.6.2 溶剂种类的影响
• 1.6.3 溶液中水含量的影响
• 1.6.4 pH值的影响
• 1.6.5 光的影响
• 1.7 川楝素的抑菌活性实验
• 1.7.1 实验预处理
• 1.7.2 最小抑菌浓度（MIC）的测定
• 1.7.3 最小杀菌浓度（MBC）的测定
• 1.7.4 抑菌环的测定
• 1.7.5 抑菌百分率的测定
• 2.结果
• 2.1 川楝素的超声提取优化条件研究
• 2.2 川楝素的分光光度法测定结果
• 2.3 川楝素的稳定性实验结果
• 2.4 川楝素的抑菌活性试验
• 3.讨论
• 3.1 川楝素的超声提取优化条件研究
• 3.2 川楝素的分光光度法测定研究
• 3.3 川楝素的稳定性研究
• 3.4 川楝素的抑菌活性试验
• 4.结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 学位论文评阅及答辩情况表