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肉鸡Ex-FABP和ADD1基因的遗传多态性及其组织表达谱分析

2020-12-11阅读(172)

肉鸡Ex-FABP和ADD1基因的遗传多态性及其组织表达谱分析

论文摘要

细胞外脂肪酸结合蛋白Ex-FABP基因是脂肪酸结合蛋白家族中的一员,它参与鸡的脂肪酸、肌纤维、骨骼等调控过程,是机体脂肪代谢过程的重要调控因子之一。α-内收蛋白ADD1基因是一种细胞膜骨架蛋白,它参与细胞信号转导、协同转运系统和胞膜离子的转运,推测它可能通过调节这些途径对家禽的脂肪代谢起作用。本文以快大青麻、矮D、土2、灵山土鸡和乌骨鸡为研究对象,利用分子生物学技术研究Ex-FABP和ADD1基因的遗传多态性,比较不同群体内基因型的分布规律,分析基因遗传变异与胴体和脂肪性状的关系；同时用实时荧光定量PCR技术分析Ex-FABP和ADD1基因在肉鸡不同组织中的表达规律。主要研究结果如下：1、肉鸡Ex-FABP基因多态性及其与胴体和脂肪性状的关联用AS-PCR的方法对Ex-FABP基因进行多态性的检测,发现其有三种基因型：AA、BB和AB型。对该位点的多态性与胴体及脂肪性状进行关联分析,结果表明：快大青麻鸡和灵山土鸡中,不同基因型间的各性状没有显著差异；矮D母鸡中,AB型个体的腹脂率显著高于AA型个体；土2公鸡中,BB型的腹脂重、腹脂率显著高于AA和AB型个体；土2母鸡中,BB型的腹脂率显著高于AA和AB型个体；乌骨鸡公鸡中,BB型个体的腿肌率的含量显著高于AB型个体。2、肉鸡ADD1基因多态性及其与胴体和脂肪性状的关联利用PCR-RFLP和DNA测序法检测出ADD1基因外显子8存在一个突变位点（C→T）,经分析为同义突变,编码亮氨酸（Leu,L）;用SB-ASA法检测出三种基因型：TT、CC和TC型。分析ADD1基因不同基因型与肉鸡胴体和脂肪性状的关系,结果表明：快大青麻母鸡中,TC型个体的腿肌率显著高于TT型和CC型个体；矮D公鸡中,TC型个体的胸肌重显著高于CC型个体；土2公鸡中,TC型个体的全净膛率显著高于CC型个体,TC型个体的胸肌重显著高于TT型个体；土2母鸡中,TT型个体的腿肌重、腿肌率显著高于CC型和TC型个体；乌骨鸡中,不同基因型的各性状间没有显著差异；灵山土鸡母鸡中,TC型个体的宰前活重、胴体重、半净膛重显著高于CC型个体,CC型个体的腿肌重显著低于TT型和TC型个体,TT型个体的腿肌率显著高于CC型个体。3、Ex-FABP和ADD1基因在肉鸡不同组织中的表达差异利用荧光定量PCR技术研究Ex-FABP和ADD1基因在肉鸡的13种组织中的表达量,结果表明：Ex-FABP基因在肺中表达量最多,其次是小脑、垂体、腹脂,在心脏、肝脏、腿肌中表达量相对较少,在脾脏、肾脏、胰腺、大脑、下丘脑、骨骼肌中表达量最少；ADD1基因在心脏、大脑、下丘脑、垂体中的表达量最高,其次是肾脏、腿肌,在肝脏、脾脏、肺、胰腺、腹脂重的表达量较少,在小脑、骨骼肌中几乎不表达。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 文献综述
  • 1. Ex-FABP基因的研究进展
  • 1.1 FABPs家族概述
  • 1.2 Ex-FABP基因的结构
  • 1.3 Ex-FABP基因的功能
  • 1.4 Ex-FABP基因的多态性及其与脂肪性状的相关
  • 2. ADD1基因的研究进展
  • 2.1 ADD1基因的结构
  • 2.2 ADD1基因的功能
  • 2.3 ADD1基因的遗传多态性研究
  • 3. 单核苷多态性的研究进展
  • 3.1 单核苷酸多态性概述
  • 3.2 单核苷酸多态性的特点
  • 3.3 单核苷酸多态性的检测方法
  • 3.3.1 基因测序
  • 3.3.2 限制性片段长度多态性
  • 3.3.3 单链构象多态性
  • 3.3.4 变性高效液相色谱
  • 3.4 等位基因特异性PCR
  • 3.4.1 等位基因特异性PCR的原理
  • 3.4.2 引物3'末端不同碱基错配对扩增特异性的影响
  • 3.4.3 其它不同因素对扩增特异性的影响
  • 4. 荧光定量PCR
  • 4.1 荧光定量PCR的原理
  • 4.2 荧光定量PCR的方法
  • 4.3 荧光定量PCR的优点
  • 5. 本实验研究的目的和意义
  • 试验研究
  • 试验一 肉鸡Ex-FABP基因的遗传多态性分析
  • 1 材料和方法
  • 1.1 材料
  • 1.1.1 实验动物
  • 1.1.2 主要仪器
  • 1.1.3 主要试剂
  • 1.2 实验方法
  • 1.2.1 屠宰性状的测定
  • 1.2.2 主要试剂的配制
  • 1.2.3 血液DNA的提取
  • 1.2.4 DNA的纯度和浓度测定
  • 1.2.5 引物的设计
  • 1.2.6 PCR反应
  • 1.3 数据分析
  • 1.3.1 等位基因频率和等位基因型频率的计算
  • 1.3.2 多态信息含量的计算
  • 1.3.3 杂合度
  • 1.3.4 有效等位基因数
  • 2. 结果和分析
  • 2.1 运用AS-PCR检测个体的基因型
  • 2.2 Ex-FABP基因的遗传多样性分析
  • 2.3 Ex-FABP基因型与屠宰性状的关联分析
  • 2.3.1 Ex-FABP基因型与快大青麻的屠宰性状相关性分析
  • 2.3.2 Ex-FABP基因型与矮D品种屠宰性状相关性分析
  • 2.3.3 Ex-FABP基因型与土2品种屠宰性状相关性分析
  • 2.3.4 Ex-FABP基因型与乌骨鸡的屠宰性状相关分析
  • 2.3.5 Ex-FABP基因型与灵山土鸡屠宰性状相关分析
  • 3. 讨论
  • 3.1 Ex-FABP基因多态性与相关性状的关系
  • 3.2 Ex-FABP基因多态性及其遗传学分析
  • 3.3 实验方法的改进
  • 4 本章小结
  • 试验二 肉鸡ADD1基因的遗传多态性分析
  • 1 材料和方法
  • 1.1 材料
  • 1.1.1 实验动物
  • 1.1.2 主要仪器
  • 1.1.3 主要试剂
  • 1.2 实验方法
  • 1.2.1 屠宰性状的测定
  • 1.2.2 血液DNA的提取
  • 1.2.3 DNA的纯度和浓度测定
  • 1.2.4 引物的设计和PCR反应
  • 1.2.5 ADD1基因片段的酶切反应
  • 1.2.6 基因测序
  • 1.2.7 SB-ASA法检测ADD1基因的多态位点
  • 1.3 数据分析
  • 1.3.1 等位基因频率和等位基因型频率的计算
  • 1.3.2 多态信息含量的计算
  • 1.3.3 杂合度
  • 1.3.4 有效等位基因数
  • 2. 结果与分析
  • 2.1 鸡ADD1基因目的片段的扩增
  • 2.2 ADD1基因目的片段的酶切结果
  • 2.3 ADD1基因的测序结果
  • 2.4 ADD1基因不同基因型的检测
  • 2.5 ADD1基因的遗传多样性分析
  • 2.6 ADD1基因的遗传多态性及其屠宰性状的关联分析
  • 2.6.1 ADD1基因型与快大青麻的屠宰性状关系分析
  • 2.6.2 ADD1基因与矮D的屠宰性状关系分析
  • 2.6.3 ADD1基因与土2品种的屠宰性状关系分析
  • 2.6.4 ADD1基因与乌骨鸡的屠宰性状关系分析
  • 2.6.5 ADD1基因与灵山土鸡的屠宰性状关系分析
  • 3. 讨论
  • 3.1 DNA的提取的优化
  • 3.2 AS-PCR方法的改进
  • 3.3 ADD1基因的群体多态性分析
  • 3.4 ADD1基因的多态性与肉鸡屠宰性状的关系
  • 4. 本章小结
  • 试验三 Ex-FABP和ADD1基因的组织表达谱分析
  • 1 材料和方法
  • 1.1 材料
  • 1.1.1. 实验动物
  • 1.1.2 实验试剂
  • 1.1.3 实验仪器
  • 1.2 实验方法
  • 1.2.1 组织RNA提取
  • 1.2.2 RNA浓度和纯度检测
  • 1.2.3 反转录
  • 1.2.4 引物设计和目的片段扩增
  • 1.2.5 荧光定量PCR
  • 1.2.6 数据分析
  • 2. 结果与分析
  • 2.1 不同组织中的PCR产物
  • 2.2 Ex-FABP、ADD1和β-actin基因的扩增曲线和溶解曲线
  • 2.3 Ex-FABP和ADD1基因的组织表达谱
  • 3. 讨论
  • 3.1 内参基因的选择
  • 3.2 RNA提取的优化
  • 3.3 Ex-FABP基因的表达规律
  • 3.4 ADD1基因的表达规律
  • 4. 本章小结
  • 全文结论
  • 参考文献
  • 致谢

    • 相关论文文献

    • [1].ADD1基因多态性与乌金猪肌内脂肪含量的关系[J]. 云南农业大学学报(自然科学) 2013(02)
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    • [9].ADD1基因Gly460Trp多态性与原发性高血压发病相关性的Meta分析[J]. 中国循证心血管医学杂志 2016(06)
    • [10].ADD1基因Gly460Trp位点与汉族人群原发性高血压的Meta分析[J]. 河南科技大学学报(医学版) 2010(04)
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