产嗜杀因子海洋酵母多样性的初步研究

论文摘要

本论文以梭子蟹的“乳化病”的病原酵母菌梅奇酵母（Metschnikowia bicuspidata） WCY为敏感菌,涂布筛选培养基,把目标酵母菌点种在平板上,培养后,观察有无抑菌圈来筛选嗜杀酵母。以本实验室收藏的部分海洋酵母菌为目标菌,以上述方法从300株中选出5株产嗜杀因子的海洋酵母菌,分别是2E00688,2E00797,2E00814,2E00871,2E01035。将这5-株酵母菌接种YPD培养基,经过28℃培养后,进行菌落形态、菌体形态的鉴定；经过碳源发酵和同化实验等生理生化鉴定；由11株（种）相近属酵母菌与一种亲缘关系较远的Debaryomyces hansenii的26S rDNA基因序列对比产生26S rDNA的基因序列聚类分析结果系统进化树,发现这5株酵母菌的26S rDNA基因序列分别与克鲁维酵母（Kluyveromyces aestuarii）,木拉克酵母属酵母（Mrakia frigida）,解脂耶罗威亚酵母（Yarrowia lipolytica）,克鲁维酵母（Kluyveromyces siamensis）,乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）的基因序列相似性最高。这5株酵母菌在GenBank中26S rDNA序列登录号分别是EU651844,EU680778,EU596441,FJ483911和FJ437050。将筛选出的5株酵母菌分类鉴定以后,进行杀菌谱实验。以待检敏感酵母菌涂布筛选培养基平板,将5株嗜杀酵母菌点种于平板上,培养后,观察抑菌圈,作出这5株嗜杀酵母菌的杀菌谱。敏感酵母菌使用本实验室收藏的梅奇酵母（M.bicuspidata）WCY,热带假丝酵母（Candida tropicalis）,酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）,粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）,丝孢酵母（Trichosporon montevideense）,解脂耶罗威亚酵母（Yarrowia lipolytica）,白假丝酵母（Candida albicans）,浅白隐球酵母（Cryptococcus aureus）。经过实验,发现这5株菌对敏感菌的抑菌效果如下：这5株菌对梅奇酵母（M.bicuspidata） WCY都有嗜杀作用,乳酸克鲁维酵母（K.lactis）对白假丝酵母（Candida albicans）有嗜杀作用,克鲁维酵母（K.aestuarii）对粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）,木拉克酵母属酵母（M.frigida）对白假丝酵母（Candida albicans）和热带假丝酵母（Candida tropicalis）有嗜杀作用,解脂耶罗威亚酵母（Y.lipolytica）对热带假丝酵母（Candida tropicalis）有嗜杀作用,克鲁维酵母（K.siamensis）对白假丝酵母（Candida albicans）有嗜杀作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 海洋环境中的病原酵母菌
• 1.2 产嗜杀因子的酵母菌
• 1.2.1 酿酒酵母嗜杀系统
• 1.2.2 Ustilago maydis嗜杀系统
• 1.2.3 Kluyveromyces lactis嗜杀系统
• 1.2.4 Pichia和Williopsis嗜杀系统
• 1.2.5 其它酵母嗜杀系统
• 1.3 嗜杀因子的作用机理
• 1.3.1 酵母细胞壁组成
• 1.3.2 嗜杀机制
• 1.4 嗜杀因子的应用
• 1.4.1 葡萄酒发酵中的嗜杀酵母
• 1.4.2 嗜杀因子作为极具潜力的抗菌剂
• 1.4.3 转基因植物的嗜杀因子的表达
• 1.4.5 异聚体蛋白质分泌物
• 1.5 本论文的立项依据
• 第二章 产嗜杀因子海洋酵母菌筛选
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 菌株来源
• 2.1.2 嗜杀酵母筛选培养基
• 2.1.3 嗜杀酵母的筛选
• 2.2 结果
• 2.2.1 海洋嗜杀酵母筛选结果
• 第三章 5株产嗜杀因子酵母的分类鉴定
• 3.1 常规鉴定
• 3.1.1 培养基
• 3.1.2 鉴定方法及步骤
• 3.2 分子生物学方法鉴定
• 3.2.1 菌株及质粒
• 3.2.2 实验方法及操作
• 3.2.3 系统进化树的做法
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 常规鉴定结果
• 3.3.2 分子方法鉴定结果
• 3.4 本章小结
• 3.5 讨论
• 第四章 5株嗜杀酵母菌的嗜杀范围
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 菌株及其来源
• 4.1.2 嗜杀酵母筛选培养基
• 4.1.3 嗜杀酵母的筛选
• 4.2 结果
• 4.2.1 嗜杀酵母菌的杀菌范围
• 4.3 结论
• 4.4 讨论
• 总结
• 创新与展望
• 参考文献
• 攻读硕士期间发表的学术论文
• 致谢