奶牛皮肤真菌病病原分离及抗真菌药物的筛选

论文摘要

近年来,随着奶牛产业的大规模发展,奶牛皮肤真菌病的发生也逐年升高,不仅给奶牛业带来了一定的负面影响,同时也影响到了人们的生产生活。本试验选取患有皮肤真菌病的奶牛作为研究对象,共采集到病料28个,通过不同方法的分离培养,有17头奶牛分离出疣状毛癣菌,为奶牛真菌病病原学研究提供一个参考。针对培养出的致病菌进行了药物敏感性试验（主要参考NCCLS M38-A方案）,选取酮康唑、伊曲康唑对致病菌进行了体外抑菌试验。试验结果显示,伊曲康唑对致病菌更加的敏感,为伊曲康唑的临床应用提供了参考依据。对于伊曲康唑的剂型研究也做了有益的探索,在前人的基础上进行了一些改进,成功的制备出伊曲康唑羟丙基-β-环糊精包合制剂。并做了相应的试验,认为此制剂可以应用于兽医临床。为了临床上应用伊曲康唑包合剂制定合理的给药方案,对伊曲康唑在山羊体内的药物代谢动力学进行了研究。将伊曲康唑包合剂以4mg/kg对山羊进行肌内注射,分别在注射后0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、48h进行静脉采血,肝素抗凝。采用甲醇沉淀蛋白质、高速离心分离的方法来提纯样品。应用高效液相色谱-紫外检测法测定血药浓度,将血药浓度代入MCPKP药代动力学处理软件进行分析。结果表明,本试验方法在20-1000ng/ml内线性范围良好,最低检测限量为20ng/ml。回收率、精密度均在允许的范围之内,方法简单、成本低、无干扰,适合临床应用。肌注伊曲康唑包合剂的药代动力学参数为:表观分布容积0.05843L/kg;一级排泄速度常数0.02020±0.01092/h;药物半衰期34.31289h;血药浓度-时间曲线下面积0.33898×104mg/（L·h）;血浆清除率0.0018L/（kg·h）;血浆药物浓度维持时间357.59h;最高药物浓度226.67ng/mL;达到最高药物浓度所需要的时间3h。伊曲康唑在山羊体内的药代动力学过程符合一房室模型。为临床有效、合理的使用伊曲康唑包合剂提供了理论支持。本实验对疣状毛癣菌的体外抑菌试验进行了较详细的研究,并取得了较好的效果。同时,还首次对山羊体内肌肉注射伊曲康唑包合剂的药代动力学特征进行了研究,并取得了相应的成果。为今后临床应用伊曲康唑包合剂治疗奶牛真菌病奠定了理论基础,并为净化奶牛真菌病,保证奶源安全、公共卫生安全做出了贡献。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 引言
• 1.1 病原菌
• 1.1.1 疣状毛癣菌
• 1.1.2 石膏样毛癣菌
• 1.2 抗真菌药物
• 1.2.1 多烯类药物
• 1.2.2 唑类药物
• 1.2.3 烯丙胺类药物
• 1.2.3.1 特比萘芬
• 1.2.3.2 布替萘芬
• 1.2.4 棘白菌素类药物
• 1.2.5 其他药物
• 1.2.5.1 阿莫罗芬
• 1.2.5.2 5-氟胞嘧啶
• 1.2.5.3 雷帕霉素
• 1.2.5.4 帕地霉素
• 1.2.5.5 利拉萘酯
• 1.2.6 新型抗真菌药物的研制与开发
• 1.2.6.1 三唑类抗真菌药物
• 1.2.6.2 作用于真菌细胞壁的抗真菌药物
• 1.2.7 抗真菌药物辅料的研究进展
• 1.2.7.1 脂质体
• 1.2.7.2 羟丙基-β-环糊精化合物
• 1.3 抗真菌药物敏感试验研究进展
• 1.3.1 液体培养基稀释法
• 1.3.2 琼脂培养基药敏试验方法
• 1.3.3 葡萄糖消耗法
• 1.3.4 比色法
• 1.3.5 流式细胞仪法（FACSmethod）
• 1.3.6 各药敏方法间比较
• 1.4 药代动力学研究进展
• 1.5 试验研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 培养基
• 2.1.2 染色液
• 2.1.3 药敏试验菌种
• 2.1.4 试验药品
• 2.1.5 试验试剂
• 2.1.6 试验仪器
• 2.1.7 试验动物
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 样品的采集与培养
• 2.2.1.1 样品采集
• 2.2.1.2 病原菌的分离与培养
• 2.2.2 药物敏感性试验
• 2.2.2.1 抗真菌药物储存液的制备
• 2.2.2.2 菌悬液的制备
• 2.2.2.3 药敏板的制备
• 2.2.2.4 培养条件
• 2.2.2.5 最小抑菌浓度（MIC）的判定
• 2.2.3 药剂的制备
• 2.2.3.1 伊曲康唑在辅料中的溶解性试验
• 2.2.3.2 酸碱度对伊曲康唑溶解性的影响
• 2.2.3.3 伊曲康唑包合剂的制备
• 2.2.3.4 环糊精包合对伊曲康唑的溶解性影响
• 2.2.4 药物代谢动力学研究
• 2.2.4.1 色谱条件
• 2.2.4.2 血样预处理
• 2.2.4.3 标准曲线制作
• 2.2.4.4 样品回收率
• 2.2.4.5 方法精密度
• 2.2.4.6 稳定性考察
• 2.2.4.7 山羊体内药物代谢动力学研究
• 3 试验结果
• 3.1 真菌的分离与培养
• 3.1.1 对照组和空白组的培养结果
• 3.1.2 患病组的培养结果
• 3.1.3 疣状毛癣菌的培养条件与生长特点
• 3.2 药物敏感性试验
• 3.3 药剂的制备
• 3.3.1 伊曲康唑溶解性试验结果
• 3.3.2 酸碱度对伊曲康唑的溶解度影响
• 3.3.3 环糊精包合对伊曲康唑溶解度的影响
• 3.4 药代动力学试验结果
• 3.4.1 色谱图分析
• 3.4.2 标准曲线及回归方程
• 3.4.3 方法回收率
• 3.4.4 方法精密度
• 3.4.5 稳定性考察
• 3.4.6 血药浓度-时间曲线
• 3.4.7 血浆药物代谢动力学参数
• 4 讨论
• 4.1 病原菌的分离与鉴定
• 4.2 药物敏感性试验
• 4.2.1 方法选择
• 4.2.2 菌悬液制备
• 4.2.3 伊曲康唑抗真菌活性优于酮康唑
• 4.3 药剂的制备
• 4.3.1 溶解度的变化
• 4.3.2 包合条件的确定
• 4.4 药物代谢动力学
• 4.4.1 方法选择
• 4.4.2 流动相选择
• 4.4.3 检测波长确定
• 4.4.4 预处理方法选择
• 4.4.5 动物体内的药代研究
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的论文